[发明专利]一种区别山羊与绵羊肉的方法

说明书

本发明提供了一种区别山羊与绵羊肉的方法：（1）提取待测样本基因组DNA；（2）以SEQ ID No:1所示序列为上游引物、以SEQ ID No:2所示序列为下游引物对步骤（1）中的DNA进行PCR扩增，退火温度为58℃，得到不同样品的扩增产物；（3）将不同样品的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳；（4）结果判断：仅扩增出1条条带的样品为绵羊肉，山羊肉或其他样品扩增出多条条带，或无条带。本发明采用的引物对以绵羊线粒体COI基因为模板，专一性好、特异性高。采用此引物对区分山羊肉与绵羊肉的方法，仅使用一对引物，还可以通过凝胶电泳的结果进行区分，无需测序，不受其他成分的影响，检测成本低，步骤简单、时间短，适合大量供试样品检验。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，具体涉及一种山羊肉与绵羊肉的分子鉴定方法。

背景技术

DNA条形码（DNA barcode）技术是一种易于统一、便于掌握、操作标准化的物种鉴定的分子诊断新技术，在消费品检测方面有着很好的应用前景。由于研究发现线粒体COI基因能够对动物界的一万三千多个物种，包括鱼类、鸟类等进行准确鉴定区分。在肉类产品中，也有研究者利用DNA条形码技术对肉制品掺伪中非定向筛选技术进行探索，认为其电泳条带通过基因测序能正确识别多种动物源成分。如专利申请CN 105755149 A中公开了利用COI基因检验羊肉的引物对，但是由于扩增片段短通过电泳会有二聚体等影响不能直观区分，只能再通过测序检测不同物种，增加了试验步骤与流程。而且没有考虑山羊与绵羊肉的检出效果，因此有必要进行DNA条形码技术在山羊肉与绵羊肉鉴定中的应用研究，以提高DNA条码技术在羊肉掺伪中的检出效率。

发明内容

针对目前采用COI区分山羊肉与绵羊肉不直观、试验繁琐的问题，本发明提供一种区别山羊与绵羊肉的引物对，能够通过扩增线粒体COI基因特异性区分山羊肉与绵羊肉。

本发明还提供了一种基于上述引物对的区别山羊与绵羊肉的方法，试验过程简单，检测时间短。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种区别山羊与绵羊肉的引物对，其序列如SEQ ID No: 1和SEQ ID No: 2所示。

所述引物对以绵羊线粒体COI基因为模板，目的片段的长度为292bp，其序列SEQID No: 3所示。

一种区别山羊与绵羊肉的方法，包括以下步骤：

（1）提取待测样本基因组DNA；

（2）以SEQ ID No: 1所示序列为上游引物、以SEQ ID No: 2所示序列为下游引物对步骤（1）中的DNA进行PCR扩增，退火温度为58℃，得到不同样品的扩增产物；

（3）将不同样品的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳；

（4）结果判断：电泳结果仅1条条带（阳性结果+）的样品为绵羊肉，山羊肉或其他样品的电泳出现多重条带（多重阳性++），或无条带（阴性结果-）。

优选的，步骤（2）中的PCR条件为：94℃，3-5min；94℃，30s，58℃，30-45s，72℃，1min，25-35个循环；72℃，5-10min。

优选的，步骤（2）中的PCR体系为：

。

优选的，琼脂糖凝胶的浓度为0.8-1.2%。

本发明具有以下有益效果：

本发明采用的引物对以绵羊线粒体COI基因为模板，专一性好、特异性高。采用此引物对区分山羊肉与绵羊肉的方法，仅使用一对引物，还可以通过凝胶电泳的结果进行区分，无需测序，同时能够不受其他成分的影响，检测成本低，步骤简单、时间短，适合大量供试样品检验。

附图说明