[发明专利]一种甜菜叶石蜡包埋制片的方法

说明书

本发明属于植物制片技术领域，公开了一种甜菜叶石蜡包埋制片的方法；取材与固定，将材料进行分割，置于广口瓶，固定处理24h；脱水与透明：脱水2h，透明1.5h；染色采用番红、固绿对染；石蜡精炼：浸蜡用75℃恒温箱进行；包埋采用半自动包埋机进行包埋，将材料放入包埋盒后摆好材料的位置，再将包埋盒放在碎冰机制成的冰块上，迅速冷却；修块、切片、粘片与脱蜡；封片：湿封，在自然风干。本发明明确甜菜叶的内部组织结构，对取材与固定、脱水与透明、熔蜡、浸蜡与包埋，切片、粘片、染色、制片等关键环节进行了优化，节省时间提高制片效率和成功率。

技术领域

本发明属于植物制片技术领域，尤其涉及一种甜菜叶石蜡包埋制片的方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：甜菜的主要产品是糖。糖是人民生活不可缺少的营养物质，也是食品工业，饮料工业和医药工业的重要原料。除生产蔗糖外，甜菜及其副产品还有广泛开发利用前景。甜菜叶是甜菜的主要生长发育器官，主要起光合作用，叶柄组织切片观察表皮层结构紧密，叶柄维管柱结构清晰完整，木质部、形成层、韧皮部清晰可辩，导管和管胞被染成红色，为成熟的木质化的细胞。

石蜡切片技术因其具有经济、方便、适用、简便、易操作、设备要求不高、材料可长期保存等优点，该技术在组织学和病理学常规制片技术中成为最为广泛的应用，在植物的科学技术研究领域扮演着十分重要的角色。但是，石蜡切片制作过程经常存在切片不成带、弯曲、出现裂纹、皱缩、不粘片、脱落、薄厚不匀等诸多问题，在不同作物、同一种作物不同器官、同一器官不同发育阶段的每一环节所采取的方法都不同，在实际操作过程中均不能照搬实验指导或者文献资料，而需要进行反复摸索才可以制得一个理想的片子。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)现有技术的石蜡切片制作过程，经常存在切片不成带、弯曲、出现裂纹、皱缩、不粘片、脱落、薄厚不匀。

(2)现有技术中在不同作物、同一种作物不同器官、同一器官不同发育阶段的每一环节所采取的方法都不同，带来巨大的工作量，使得工作效率降低。

解决上述技术问题的方法和意义：切片刀口不锋利、蜡块与刀口平行角度不正确，是不能切成连续蜡带的主要原因。应注意刀口锋利度与蜡块的正确位置。蜡带上材料出现空洞是由于石蜡没有完全浸入材料应重新浸蜡。蜡带皱缩的原因是由于石蜡太软，融点较低或切片时温度过高所致。因此，在夏天切片宜用融点较高的石蜡。另外，切片过薄低于5微米需要低温否则也容易皱缩。切片较厚在12微米以上，如果石蜡太硬则易碎裂。蜡带弯曲是由于蜡块的上下两边修块不平行，而无法平展。蜡带出现裂纹或裂缝，是切片刀口某处有小口或切片刀已钝。应移动切片刀的位置。注意用毛笔刷去刀刃上的蜡屑。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种甜菜叶石蜡包埋制片的方法，

本发明是这样实现的，一种甜菜叶石蜡包埋制片的方法，具体包括以下步骤：

步骤一：取材与固定：将材料进行分割，置于广口瓶，固定24h；

步骤二：脱水与透明：脱水2h，透明1.5h；

步骤三：染色：采用番红、固绿对染；染色在纯酒精：纯二甲苯比例为1:1透明过程中加入染色剂，进行染色；

步骤四：石蜡精炼：浸蜡用75℃恒温箱进行，分别标记为蜡杯Ⅰ，蜡杯Ⅱ，蜡杯Ⅲ；

步骤五：包埋：采用半自动包埋机进行包埋，将材料放入包埋盒后摆好材料的位置，再将包埋盒放在碎冰机制成的冰块上，迅速冷却；

步骤六：修块、切片、粘片与脱蜡：将载玻片涂上一层粘片剂，滴一滴40℃左右的温水，将切好的蜡带用解剖针挑起放到上边，使切片展开，然后放到40℃烘箱或展片机上烘干，烘1h以上或更长时间；