[发明专利]四苯基乙烯微晶、制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于肿瘤标志物检测的电致化学发光传感器，其特征在于，其以四苯基乙烯微晶为ECL发光体，所述的四苯基乙烯微晶是四苯基乙烯粉末通过表面活性剂辅助自组装而得，具体步骤如下：四苯基乙烯粉末溶于有机溶剂中制成溶液，将溶液注入表面活性剂水溶液中并搅拌，离心取沉淀，洗涤，真空干燥，即得；

该电致化学发光传感器是通过以下方法构建得到的：

（1）将四苯基乙烯微晶分散到超纯水中，制成四苯基乙烯微晶水溶液；

（2）在干净的玻碳电极表面上滴加四苯基乙烯微晶水溶液，自然晾干后通过静电吸附作用组装上钯纳米颗粒，得到修饰有钯纳米颗粒/四苯基乙烯微晶的玻碳电极；

（3）5'和3'分别修饰猝灭物质二茂铁和巯基的底物链S3，通过配位键组装在已修饰有钯纳米颗粒/四苯基乙烯微晶的玻碳电极表面，ECL信号呈“off”状态；

S3的核苷酸序列为：5'-Fc-TAGTAGCAGrAGCCCTGGATCGTTTT(CH₂)₆-SH-3'；

（4）用巯基己烷封闭电极界面的非特异性吸附位点，储存于4℃冰箱中备用；

该电致化学发光传感器的使用方法，是将所述电致化学发光传感器与目标物诱导的酶促循环放大产物DNA双腿步行器S1/S2以及固定浓度的Pb²⁺溶液在37℃条件下孵育90分钟，之后在去离子水中淌洗；然后进行电致化学发光检测即可；在辅酶因子Pb²⁺存在的情况下，DNA双腿步行器S1/S2的双腿与底物链S3互补并完成S3的剪切，从而释放出猝灭物质二茂铁，实现ECL信号的恢复，“on”状态；

所述DNA双腿步行器S1/S2的制备方法如下：首先制备三链DNA复合结构S0-S1/S2-S0，即将MUC1的DNA适体链S0、DNA 酶链S1和DNA 酶链S2溶液，按比例混合使复合结构S0-S1/S2-S0浓度为1 μmol/L，加热到95℃并保持10分钟，冷却至室温；然后在微型离心管内进行不同浓度目标物引导的酶链放大反应；

S1的核苷酸序列为：5'-CGATCCAGGGTCCGAGCCGGTCGAACTGCTACTAT₁₅CGCACAGAGGAGGGCCGTAAGTTAGTTGGAG-3'；

S2的核苷酸序列为：5'-CGATCCAGGGTCCGAGCCGGTCGAACTGCTACTAT₁₅CTCCAACTAACTTACGGCCCTC CTCTGTGCG-3'；

S0的核苷酸序列为：5'-AGTAGCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGGATCG-3'。