[发明专利]多表位抗原及其制备方法与在制备防治鹦鹉热衣原体感染的药物中的应用

说明书

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及多表位抗原及其制备方法与在制备防治鹦鹉热衣原体感染的药物中的应用。本发明提供了SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多表位抗原、包括该抗原的融合多肽及该融合多肽的用途。该抗原分子量小，制备简单，免疫原性与大分子蛋白相当。实验表明，该抗原能够诱导体液和Th1细胞免疫反应产生，产生具有显著意义的特异性抗体以及γ干扰素、白介素2。疫苗接种能显著降低感染小鼠肺组织的衣原体载量以及炎症侵润程度，并显著降低炎性因子IFN‑γ和IL‑6水平。此外，从接种疫苗的小鼠身上获得的CD4+T细胞，经过继转移后显著降低了感染小鼠肺组织的衣原体载量，表明其在细胞免疫应答中具有重要意义。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及多表位抗原及其制备方法与在制备防治鹦鹉热衣原体感染的药物中的应用。

背景技术

鹦鹉热衣原体是一种人畜共患病原体，可导致禽类和鸟类的鹦鹉热、鸟疫，以及人类的非典型肺炎。鹦鹉热衣原体的特征包括临床疾病的爆发过程和非常广泛的宿主范围。人类可通过吸入感染鸟类的尿液、粪便或其他排泄物的污染气溶胶发生感染。在成功传播给人类后，主要表现为呼吸道感染、菌血症，而在感染早期主要引起社区获得性肺炎。如不及时治疗，则可能导致包括脑炎和心肌炎等更加严重的并发症。衣原体感染虽然可以通过抗生素治疗有效控制，但它很容易复发。因此，安全有效的疫苗被认为是预防鹦鹉热衣原体感染和减少衣原体疾病传播最有效的方法。

理想的候选抗原应该包含多个B细胞和T细胞表位，当抗原呈递细胞与MHC I类、MHC II类分子结合呈现抗原时，可诱导产生免疫应答。以往的研究表明，鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白(MOMP)是一种高度保守的蛋白，可诱导动物模型产生特异性的抗衣原体免疫应答。此外，鹦鹉热衣原体MOMP可能是存在较多T细胞和B细胞表位潜在候选抗原。质粒是衣原体中重要的毒力因子，包含8个开放阅读框(ORFs)，分别编码8个质粒蛋白。重组质粒蛋白Pgp3或Pgp4免疫可显著降低鼠衣原体载量，减轻感染小鼠肺部炎症反应。在我们之前的研究中，鹦鹉热衣原体的质粒编码CPSIT_p8 (pgp4)蛋白在BALB/c小鼠体内免疫接种三次后，诱导了产生显著的免疫保护作用。CPSIT_p6蛋白与CPSIT_p8具有相似的功能，由于其序列较长，潜在表位较多，更适合于优势区域的筛选。

目前，鹦鹉热衣原体的疫苗都是以蛋白为抗原的，主要是以鹦鹉热衣原体MOMP和CPSIT_p6蛋白。相较于常规的减毒活疫苗以及亚单位重组蛋白疫苗，多肽疫苗其优势在于：

1.特异性强、免疫靶向性好：针对复杂的非连续性抗原片段，构建相应的合成抗原多肽。其融合了不同的T细胞以及B细胞表位能够产生特异性更强的抗衣原体抗体，更具针对性，并能够直接靶向作用于体内的衣原体；

2.毒副作用小、排异反应少：由于合成过程我们只选取了抗原性较强的细胞表位片段，因此不含蛋白抗原中的高反应原性成分(脂多糖、毒素)。同时还能够去除对免疫个体本身分子具有致敏性和交叉反应活性的抗原片段，进而最大程度地减少了毒副反应以及排异反应的发生；

3.生产技术安全、高效：在多肽片段合成过程中，成熟的合成技术可以将不同抗优势抗原表位有效地融合在一个载体上，同时使片段纯度达到90%以上，远远高于蛋白抗原。而高纯度的融合多肽相较于纯度较低的重组蛋白而言，也能够大大降低非抗原物质对免疫过程影响；

4.结构稳定，不易变性：重组多肽的线性结构不同于蛋白的空间结构，其抗原结构更加稳定，在免疫过程中不会产生新的空间构象而影响免疫效果。

因此，与以蛋白为抗原的疫苗相比，多肽疫苗更适于作为候选的抗衣原体感染疫苗。但是，虽然多肽疫苗存在诸多优势，但优势表位的筛选始终是多肽疫苗开发中的难题之一，由于一个蛋白可存在多个表位，而多肽片段较短，其表位的筛选始终是本领域的研究热点。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供多表位抗原及其制备方法与在制备防治鹦鹉热衣原体感染的药物中的应用。