[发明专利]临床局部注射用间充质干细胞保存液及保存间充质干细胞的方法

说明书

本发明公开了一种临床局部注射用间充质干细胞保存液及保存间充质干细胞的方法，保存液包括以下体积百分比的组分：自体血浆裂解物1‑5％、自体干细胞条件培养基提取物1‑5％、抗氧化剂0.1‑1％、透明质酸0.1‑0.4％，余量为生理盐水注射液。采用该保存液保存间充质干细胞后，细胞活率高，维持细胞活力的时间长，且保存液中无外源成分，安全性高。

技术领域

本发明属于干细胞保存液技术领域，具体涉及一种临床局部注射用间充质干细胞保存液及保存间充质干细胞的方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)来源于发育早期的中胚层，1968年MSC在骨髓中发现，发现其具有多向分化潜能/造血支持和促进干细胞植入/免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。

细胞治疗可以修复受损细胞，替代坏死细胞，激活休眠细胞，再生新鲜细胞。干细胞注射到人体后会分泌细胞因子，可以促进细胞的生长，分泌的生长因子与衰老的细胞受体结合，增强细胞的活性，延缓衰老；同时分泌的生长因子与损伤的细胞受体相结合，可以起到损伤细胞的修复作用。

由于间充质干细胞在细胞分化和组织再生过程中存在着重要的调控作用，因此在组织工程中可作为种子细胞参与组织与器官的再生和重建。关于干细胞的研究和应用有可能为糖尿病以及神经系统、心血管、肝脏等重大疾病的治疗带来突破，同时也为各种组织缺损后的修复和重建带来新的希望，目前已成为未来生命科学和医学研究领域广泛关注的焦点。

细胞治疗涉及细胞的制备、扩增、回输等过程，通常，这些过程的实施地点及时间并不一致，从而需要把细胞运输到目的地，在运输过程中需要细胞保存液来维持细胞活性。但现有的细胞保存液加入了外源物质，会影响其安全性，同时现有保存液维持细胞活力的时间较短。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种临床用间充质干细胞保存液及保存间充质干细胞的方法，可有效解决现有的干细胞保存液安全性低，维持细胞活力的时间短的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种临床局部注射用间充质干细胞保存液，包括以下体积百分比的组分：

自体血浆裂解物1-5％、自体干细胞条件培养基提取物1-5％、抗氧化剂0.1-1％、透明质酸0.1-0.4％，余量为生理盐水注射液，这些成分均为临床注射级试剂；

其中，自体干细胞条件培养基提取物通过以下方法制备得到：

(1)选择生长状态良好的间充质干细胞，培养至生长密度为60-80％，然后使用PBS溶液对细胞进行清洗；

(2)将清洗后的细胞置于无酚红的DMEM培养基中，并加入0.1-1μmol/L黄芪甲苷，在培养箱中继续诱导培养20-28h；

(3)诱导培养结束后，去除培养基中分子量为3000以下的蛋白成分，然后进行浓缩，制得。

进一步地，临床局部注射用间充质干细胞保存液，包括以下体积百分比的组分：

自体血浆裂解物3％、自体干细胞条件培养基提取物3％、抗氧化剂1％、透明质酸0.4％，余量为生理盐水注射液。

进一步地，步骤(1)中将间充质干细胞置于DMEM培养基中进行培养，培养条件为37℃，5％CO₂。

进一步地，步骤(2)中黄芪甲苷的加入量为1μmol/L。

进一步地，步骤(2)中诱导培养时培养条件为37℃，5％CO₂。