[发明专利]临床局部注射用间充质干细胞保存液及保存间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种临床局部注射用间充质干细胞保存液，其特征在于，包括以下体积百分比的组分：

自体血浆裂解物1-5%、自体干细胞条件培养基提取物1-5%、抗氧化剂0.1-1%、透明质酸0.1-0.4%，余量为生理盐水注射液；

其中，自体干细胞条件培养基提取物通过以下方法制备得到：

（1）选择生长状态良好的间充质干细胞，培养至生长密度为60-80%，然后使用PBS溶液对细胞进行清洗；

（2）将清洗后的细胞置于无酚红的DMEM培养基中，并加入0.1-1μmol/L黄芪甲苷，在培养箱中继续诱导培养20-28h；

（3）诱导培养结束后，去除培养基中分子量为3000以下的蛋白成分，然后进行浓缩，制得；

其中自体血浆裂解物通过以下方法制备得到：

（1）采集人外周血，离心，使其分为四层，从下而上依次为血浆层、白膜层、凝胶层和血细胞层，吸取血浆层和白膜层，立即置于-80℃冻存；

（2）将步骤（1）所得冻存物冻融后进行离心，吸取上部分血浆，弃去底部沉淀物，制得自体血浆裂解物。

2.根据权利要求1所述的临床局部注射用间充质干细胞保存液，其特征在于，包括以下体积百分比的组分：

自体血浆裂解物3%、自体干细胞条件培养基提取物3%、抗氧化剂1%、透明质酸0.4%，余量为生理盐水注射液。

3.根据权利要求1或2所述的临床局部注射用间充质干细胞保存液，其特征在于，步骤（1）中将间充质干细胞置于DMEM培养基中进行培养，培养条件为37℃，5%CO₂。

4.根据权利要求1或2所述的临床局部注射用间充质干细胞保存液，其特征在于，步骤（2）中黄芪甲苷的加入量为1μmol/L。

5.根据权利要求1或2所述的临床局部注射用间充质干细胞保存液，其特征在于，步骤（2）中诱导培养时培养条件为37℃，5%CO₂。

6.根据权利要求1或2所述的临床局部注射用间充质干细胞保存液，其特征在于，自体干细胞条件培养基提取物中含有VEGF、EGF、FGF、IGF-1和HGF，且VEGF、EGF、FGF、IGF-1和HGF的浓度分别为3000-6000ng/mL、100-300pg/mL、300-600pg/mL、3000-5000ng/mL和1000-2000pg/mL。

7.根据权利要求1或2所述的临床局部注射用间充质干细胞保存液，其特征在于，抗氧化剂为维生素C注射液。

8.采用权利要求1-7任一项所述的临床局部注射用间充质干细胞保存液保存间充质干细胞的方法，其特征在于，包括将间充质干细胞置于保存液中处理的步骤。

9.根据权利要求8所述的临床局部注射用间充质干细胞保存液保存间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：将间充质干细胞置于保存液中，使得细胞终浓度为（1-5）×10⁶个/ mL，然后置于4℃保存。