[发明专利]一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法

说明书

本发明公开了一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法，包括无菌苗的获取、不定芽的诱导、不定芽的伸长、不定芽的生根和移栽等步骤。灭菌后的种子接种在不添加植物激素的MS培养基上，选取适宜苗龄无菌苗的带柄子叶作为外植体，利用研究得到的诱导不定芽培养基产生不定芽，使得诱导分化率提高；利用研究得到的伸长培养基，使不定芽的伸长诱导率得到了很大的提升；生根培养基有利于不定根的诱导，从而提高了再生植株的成活率。采用中国辣椒带柄子叶作为外植体，结合筛选的诱导不定芽培养基、不定芽伸长培养基和生根培养基，显著提高了诱芽率和生根率，本发明构建的离体再生体系，为中国辣椒遗传转化的研究奠定了基础。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法。

背景技术

组织培养是农业生物技术的重要组成部分，在蔬菜作物离体再生过程中发挥重要作用。辣椒为茄科辣椒属植物，是我国主要蔬菜之一，辣椒属共有5个栽培种：一年生辣椒(Capsicum annuum)、中国辣椒(Capsicum chinense)、灌木状辣椒(Capsicumfrutescens)、下垂辣椒(Capsicum baccatum)和柔毛辣椒(Capsicum pubescens)。中国辣椒特点是花冠为白色，每一节位2朵花以上，萼片有缢缩。种内大多数叶片与果皮有皱缩，果实有特殊芳香味，高辣(也存在少量低辣和果面光滑的品种)。在我国栽培的有一年生辣椒、灌木状辣椒和中国辣椒，中国辣椒栽培优势区分布在海南、云南和广西等地。目前辣椒离体再生的研究多集中于一年生辣椒(Capsicum annuum)，其它辣椒栽培种离体再生体系的研究极少。在中国辣椒研究中，基因型、外植体类型及激素配比对再生体系的影响大，使再生体系构建较困难，进一步影响到中国辣椒的遗传转化。本发明针对中国辣椒(Capsicumchinense)离体再生体系的构建进行研究。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法，提高了中国辣椒的不定芽诱导分化率、伸长率和生根率的作用。

本发明采用的技术手段如下：一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法，包括以下步骤：

(1)无菌苗的获取：取中国辣椒的种子放置在过滤器上，然后放入培养瓶中，加入无菌水，水浴加热后，进行灭菌处理，最后将灭菌处理后的种子吸干水分，接种至不添加植物激素的MS培养基上，光照培养得到无菌苗。

(2)不定芽的诱导：取培养13～17d生长正常的无菌苗，切取0.5～1cm带柄子叶作为外植体，接种到灭菌后的诱导不定芽培养基中，进行不定芽的诱导培养，带柄子叶周围生成不定芽。

(3)不定芽的伸长：将分化出2～3cm的不定芽切分，转移至伸长培养基中培养。

(4)不定芽的生根：将步骤(3)中培养伸长至3～5cm的不定芽切分，接种至生根培养基中诱导生根。

(5)移栽：待生根苗株高为8～12cm后，去瓶盖培养1～2d，将生根苗株从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入品式泥炭土，置于光照培养箱内培养，保持土壤湿润，幼苗成活后移栽至大田。

进一步地，所述步骤(1)中，置于50～60℃水浴锅中加热20～40min。

进一步地，所述步骤(1)中，灭菌处理先用70％～80％乙醇震荡处理1～3min，然后用无菌水冲洗，再加入3％～5％次氯酸钠溶液进行震荡摇晃10～20min，接着无菌水冲洗3～6次。

进一步地，所述步骤(1)中，光照培养时间为14～18h，光照培养强度为2000～2500lux。

进一步地，所述MS培养基为含琼脂和蔗糖的培养基。

进一步地，所述步骤(2)中，所述诱导不定芽培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+IAA0.1mg/L，诱导培养15～25d。