[发明专利]一种亚甲基蓝衍生物及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种亚甲基蓝衍生物，其特征在于，是4-叠氮基苄基-3,7-双(二甲氨基)-10H-吩噻嗪-10-羧酸酯(MB1)，结构式为：

2.如权利要求1所述的一种亚甲基蓝衍生物的合成方法，其特征在于，步骤为：

(1)在N₂保护、冰浴条件下，将1摩尔当量4-氨基苯甲醇溶于10％的盐酸溶液中；将1-1.5摩尔当量亚硝酸钠溶解在水中，在30min内逐滴加入前述溶液中；然后将1-1.5摩尔当量叠氮化钠分批加入其中，混合物搅拌反应2h；用乙酸乙酯萃取和水洗涤，收集有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在旋转蒸发仪上旋转蒸发后得黄色油状化合物4-叠氮基苯甲醇；

(2)将1-1.2摩尔当量4-叠氮基苯甲醇，1摩尔当量3,7-双(二甲基氨基)-10H-吩噻嗪-10-碳酰氯，2.9-3.1摩尔当量碳酸钠和1摩尔当量4-二甲氨基吡啶溶于二氯甲烷中，在N₂保护、冰浴条件下搅拌反应15h；除去溶剂并将粗产物进行硅胶柱色谱纯化，得到白色固体4-叠氮基苄基-3,7-双(二甲氨基)-10H-吩噻嗪-10-羧酸酯(MB1)。

3.如权利要求1所述的亚甲基蓝衍生物在H₂S检测中的应用。

4.一种用权利要求1所述的亚甲基蓝衍生物MB1检测H₂S的方法，其特征在于，步骤为：

(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的PBS缓冲溶液，配制2mM的MB1的DMSO溶液，配制6.5mM的Na₂S的水溶液；

(2)、将1mL pH 7.4的PBS缓冲溶液、1mL DMSO溶液和5μL MB1的DMSO溶液加到紫外比色皿和荧光比色皿中，分别在紫外分光光度仪和荧光分光光度仪上检测，随着待测样加入时间的增加，687nm的荧光强度逐渐增强；

(3)、将1mL pH 7.4的PBS缓冲溶液、1mL DMSO溶液和5μL MB1的DMSO溶液加到另外10个荧光比色皿中，分别再加入体积为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10μL的Na₂S(65×10^-4M)溶液，在荧光分光光度仪上测定687nm处对应的荧光强度，以Na₂S溶液的浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制图，得到H₂S浓度的工作曲线；线性回归方程为：y＝7.7529c+115.9933，c的单位为μM；

(4)将1mL pH 7.4的PBS缓冲溶液、1mL DMSO溶液和5μL MB1的DMSO溶液加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取VμL待测样品溶液，加入到此荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的比值代入步骤(3)的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C_待测样＝2000μL×c×10^-6/VμL，即可求得H₂S的浓度。