[发明专利]一种无血清无DMSO组织工程骨冻存液及其制备和冻存方法

权利要求书

1.一种无血清无DMSO的组织工程骨冻存液，其特征在于，所述组织工程骨冻存液以不含血清的培养基为基质，冻存液中包括以下组分：

丙二醇、聚乙二醇、维生素C和谷氨酰胺，余量为培养液。

2.根据权利要求1所述的组织工程骨冻存液，其特征在于，每100mL所述组织工程骨冻存液的组分含量满足以下(a)-(d)中一个或多个条件：

(a)所述丙二醇为5mL-16mL；

(b)所述聚乙二醇为5g-30g；

(c)所述维生素C为5mg-150mg；或

(d)所述谷氨酰胺为30mg-500mg。

3.根据权利要求1或2所述的组织工程骨冻存液，其特征在于，所述不含血清的培养基为alpha-MEM基础培养基。

4.根据权利要求1-3任一项所述的组织工程骨冻存液，其特征在于，所述冻存液适用的组织工程骨包括脂肪干细胞复合猪源脱钙骨或脂肪干细胞复合人源脱钙骨。

5.根据权利要求1-4任一项所述的组织工程骨冻存液的制备方法，其特征在于，将所述组织工程骨冻存液的配方中各组分混合。

6.根据权利要求1-4任一项所述的组织工程骨冻存液的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：在不含血清的培养基中依次加入维生素C和谷氨酰胺，混匀；之后加入聚乙二醇，充分溶解后摇匀，最后加入丙二醇，混匀，过滤除菌后，置于4度避光保存备用；优选地，所述不含血清的培养基是alpha-MEM基础培养基。

7.根据权利要求1-4任一项所述的组织工程骨冻存液在冻存组织工程骨中的应用。

8.一种组织工程骨的冻存方法，其特征在于，用如权利要求1-4任意一项所述的组织工程骨冻存液冻存所述组织工程骨。

9.根据权利要求8所述的冻存方法，其特征在于，包括如下步骤：

将组织工程骨取出，用生理盐水浸泡，然后与权利要求1-4任意一项所述的组织工程骨冻存液混合，冻存。

10.根据权利要求8或9所述的冻存方法，其特征在于，所述冻存方法包括如下步骤：将脂肪干细胞接种于脱钙骨支架，成骨诱导后取出细胞-支架材料复合物，置于冻存管中，加入所述组织工程骨冻存液，-80℃冻存；冻存一定时间后将冻存管移入液氮罐中保存。