[发明专利]一种石油腐蚀性微生物检测工具箱用微生物活性显色增强方法

说明书

本发明公开了一种石油腐蚀性微生物检测工具箱用微生物活性显色增强方法，包括：在微生物于固体培养基上生长后，用碱性溶液喷淋含有红四氮唑或蓝四氮唑的甲臜类还原产物的固体培养基表面。上述方法能更灵敏地用肉眼观察到固体培养基上这些色素的还原产物的颜色，从而能更灵敏地用肉眼观察和判定固体培养基上的微生物菌落的多少以及活性程度。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种石油腐蚀性微生物检测工具箱用微生物活性显色增强方法。

背景技术

石油或航空燃油储存过程会引发大型储罐的腐蚀。据报道，这类腐蚀主要由微生物滋生所导致。油料中存在的腐蚀性微生物，主要有细菌、真菌和放线菌三类。有的微生物腐蚀性特别强，例如硫酸盐还原菌(SRB)、硫氧化菌和铁细菌，其代谢活动会释放出有机酸和其它腐蚀性产物，在储存罐和飞机油箱中生长繁殖会导致油罐腐蚀、可以将油罐壁、油箱壁腐蚀破坏，造成油罐、油箱漏油等严重故障；有的微生物如树脂芽枝霉等繁殖很快，很容易集结成可见的絮状物，当包成团时，体积增长非常快，很容易造成飞机的燃料过滤器堵塞、燃油喷嘴结焦，或者油量指示设备故障，指示器读数不准确，甚至会威胁飞机飞行安全，造成飞机发动机空中停车。

非常精确地鉴定油料中微生物到底是什么，精确到菌种或菌株细分类，这对于石油或航空燃油储存过程中的日常腐蚀性微生物的污染预警，代价过高，操作繁琐，是不必要的。我们只需要知道油料中微生物污染总概况即可。或者，对某些腐蚀性细菌类别，例如硫酸盐还原菌(SRB)、硫氧化菌和铁细菌的污染，可以增加重点监测。

在发明专利201510297486.4中，发明人提及一种快速检测含油污水处理体系中石油烃及菌体含量方法，此发明专利是在一特定波长条件下，直接用分光光度计测定含有石油烃和细菌的悬液总光吸收值，用其预先实验得到的简单的二元一次方程，计算污水中石油烃及菌体含量。发明专利CN201110122479中，发明人提及一种中高温油藏细菌种群检测基因芯片及其用途。此发明专利是以待检测样品的基因组为模板，用标记的引物组进行扩增，然后将得到的扩增产物与生物芯片上的探针进行杂交，根据杂交结果确定油藏细菌群落构成，因而价格过高，并需要分子生物学昂贵设备。

在发明专利20091016426.4中，发明人提及一种飞机燃油微生物检测方法，此方法在不同培养基中加燃油样本培养和染色，形成易观察的菌落，用目视和显微镜对比观察来检测和监控飞机燃油系统、加油车、油库、油罐中的微生物污染程度，其微生物染色操作是挑取少许待检菌于载玻片上的无菌水中，混合均匀后涂布，进行简单染色或革兰氏染色，而不是在培养基上进行微生物活性显色。

关于油料微生物污染概况的检测，用不同原理的检测方法得出的结果也不尽相同。目前，国际航空运输协会(IATA)主要推荐MicrobMonitor 2(简称MM2)、HY-LiTE两类检测方法。英国ECHA公司(ECHA Microbiology Ltd.,UK)商品化的MM2工具箱，是将油料中的微生物生长在一种固体培养基上，做总体的微生物活性显色鉴定。此工具包的技术标准在2015年被美国材料与试验协会(American Society for Testing Materials，ASTM)收录为新的技术标准(参见ASTM D7978)[Google:MicrobMonitor2fuel test adopted as NEWASTM standard method(D7978)]。MM2工具箱，其原理是将石油样品混合到灭过菌的固体培养基上，经过一段时间的培养，石油中所含的微生物会生长成菌落，培养基中还预加色素分子作为活性显色剂，该菌落可以还原色素分子，其产物形成红色。因而可以肉眼更清晰地观测各类菌落的数目。其操作要领主要有两条：一是需要无菌操作，包括燃油取样器的取出和样品注入MM2培养瓶内；二是专业标准色卡的解读。