[发明专利]一种疟原虫蛋白的制备方法及其在抗肿瘤方面的应用

说明书

本发明公开了一种疟原虫蛋白的制备方法及其在抗肿瘤方面的应用，属于生物医药技术领域。本发明的疟原虫蛋白含有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明所述的蛋白质对肿瘤细胞有一定的杀伤效果，对肿瘤细胞胞HepG2的抑制率达到58.1％，接近剂量为25μg/mL抗肿瘤药物5‑Fu对肿瘤细的抑制效果，在临床上有一定的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种疟原虫蛋白的制备方法及其在抗肿瘤方面的应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

疟疾是伴随人类出现最早的疾病，至今仍是全球范围内最重要的感染性疾病之一。目前关于疟疾的研究大多数集中在不同种属疟原虫入侵机制和疟疾疫苗的研发，而对疟原虫的药用价值或潜在的临床应用价值研究较少。有临床数据表明肿瘤患者感染疟原虫后，患者体内的肿瘤生长受到抑制，揭示疟原虫在临床肿瘤治疗的应用可能性。疟原虫主要通过虫体表面或内部携带的蛋白与肝细胞或红细胞表面受体结合后侵入到机体内，由于从疟原虫裂殖子提取蛋白困难巨大，因此需要通过对相关蛋白进行分析筛选具有抗肿瘤活性的蛋白。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种疟原虫蛋白在制备抗肿瘤药物方面的应用；所述疟原虫蛋白含有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

在本发明的一种实施方式中，所述应用包括但不限于制备抗肺癌、肝癌或前列腺癌的药物。

在本发明的一种实施方式中，所述药物包括但不限于疫苗、抑制剂、免疫调节剂。

在本发明的一种实施方式中，所述疫苗含有SEQ ID NO.1所示的蛋白。

本发明的第二个目的是提供一种制备所述疟原虫蛋白的方法，包括以下步骤：

1)扩增编码所述疟原虫蛋白的基因，将扩增的目的基因连接到表达载体上，得到重组质粒；

2)将成功表达目的基因的重组质粒转化到表达细胞中，诱导目的蛋白的表达。

在本发明的一种实施方式中，所述方法具体包括如下步骤：

1)设计引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示引物，扩增目的基因，将扩增的目的基因连接到表达载体上；

2)将目的基因测序正确的重组质粒转化到表达细胞中，通过IPTG诱导目的蛋白的表达，并进一步制备纯化的目的蛋白样品。

在本发明的一种实施方式中，所述表达载体可以为原核细胞表达载体、真核细胞表达载体或昆虫细胞表达载体。

在本发明的一种实施方式中，所述的表达细胞可以为原核表达细胞、真核表达细胞或昆虫细胞。

在本发明的一种实施方式中，所述表达载体为pET28a(+)，所述表达细胞为E.coliBL21(DE3)。

本发明的第三个目的是提供一种抗肿瘤的药物，其含有SEQ ID NO.1所示疟原虫蛋白或其活性物质，及药学上可接受的载体。

本发明还要求保护所述疟原虫蛋白在制备非医药用途的产品方面的应用。

有益效果：本发明首次筛选并验证了PvTrag28蛋白在抗肿瘤方面的应用，CCK8增值实验结果显示PvEXP100蛋白可显著抑制肝癌细胞HepG2细胞的增殖，抑制率为58.1％，且几乎完全抑制HepG2细胞的迁移性能。本发明的另外一个目的是提供本发明所制备的蛋白PvTrag28在制备抗肿瘤药物中的应用，即以本发明的PvTrag28蛋白为活性成分或原料的抗肿瘤药物，特别是肺癌、肝癌、前列腺癌。

附图说明

图1为PvTrag28蛋白考马斯亮蓝染色示意图(A)和Western blotting检测图(B)，