[发明专利]一种β-内酰胺类药物受体蛋白及其应用

说明书

本发明实施例公开了一种β‑内酰胺类药物受体蛋白及其应用，该受体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。本发明上述受体蛋白即能够与青霉素类药物特异性结合也能够与头孢菌素类药物特异性结合，并具有较高的特异性。

技术领域

本发明涉及β-内酰胺类药物检测技术领域，具体涉及一种β-内酰胺类药物受体蛋白及其应用。

背景技术

乳及其制品已经成为重要动物源性食品，泌乳动物如奶牛、奶山羊等会因各种原因导致乳房炎的发生。其中由链球菌和金黄色葡萄球菌引起的细菌性乳房炎已成为乳房炎的主要原因之一。兽医临床上常采用青霉素类、头孢菌素类等β-内酰胺类药物治疗，最终在乳汁中产生药物残留，而药物残留超标可能引起潜在健康风险。

目前，对β-内酰胺类药物的检测主要有仪器分析方法和微生物生长抑制法以及免疫检测法等，乳品生产企业、奶站和基层检测实验室采用的是低成本、灵敏快速的免疫学检测方法，其中以胶体金免疫层析检测试纸条和酶联免疫检测试剂盒为主；免疫学方法核心原理是借助能与β-内酰胺类药物的母核结构β-内酰胺环特异性结合的抗体、青霉素结合蛋白或者青霉素类药物受体，对此类药物进行广谱性的检测分析。

由于β-内酰胺类药物发展非常迅速，从最初的青霉素已经发展到第四代头孢类药物，药物分子结构在母核结构的基础上越来越复杂，传统的基于识别母核结构的免疫学检测分析方法已经难以满足目前世界各国MRL的要求。特别是常规的母核结构识别分子(即特异性抗体、结合蛋白或受体蛋白)具有片面性，对青霉素类药物(例如青霉素G、氨苄青霉素、临氯青霉素和阿莫西林)敏感的分子，而对头孢菌素类(例如头孢噻呋、头孢喹肟和头孢洛宁)不敏感；而对头孢类药物敏感的识别性分子，对青霉素类敏感性又较差。

发明内容

本发明实施例的第一目的在于提供一种β-内酰胺类药物受体蛋白，该受体蛋白即能够与青霉素类药物特异性结合也能够与头孢菌素类药物特异性结合，并具有较高的特异性。

本发明实施例的第二目的在于提供一种β-内酰胺类药物受体蛋白在β-内酰胺类药物检测试剂盒以及胶体金检测试纸条中的应用，该应用操作简单，灵敏度高，而且能够快速准确的检测样本中的β-内酰胺类药物；并且实现了对样品的现场检测。

为实现上述目的，本发明实施例提供一种β-内酰胺类药物受体蛋白，所述受体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

进一步地，所述受体蛋白氨基酸序列选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ IDNO：4中的任意一种。

在本发明中对所述受体蛋白的制备方法不做严格限制，例如，可以通过人工合成的方法制备得到，也可以通过生物信息学手段根据氨基酸序列筛选得到相对应的基因序列，例如，筛选得到与氨基酸序列SEQ ID NO：1相对应的基因序列如SEQ ID NO：5所示；与氨基酸序列SEQ ID NO：2相对应的基因序列如SEQ ID NO：6所示；与氨基酸序列SEQ ID NO：3相对应的基因序列如SEQ ID NO：7所示；与氨基酸序列SEQ ID NO：4相对应的基因序列如SEQ ID NO：8所示；并通过基因序列表达得到对应氨基酸序列的受体蛋白。

本发明另一实施例提供一种β-内酰胺类药物检测试剂盒，所述试剂盒包括盒体、设置在盒体内可拆卸的酶标板和试剂，所述酶标板的每个孔包被有所述受体蛋白；所述试剂包括酶标记的氨苄青霉素、标准溶液、显色液、终止液、洗涤液和样本稀释液。

优选地，所述酶标记的氨苄青霉素为辣根过氧化物酶标记的氨苄青霉素；更优选地，所述辣根过氧化物酶标记的氨苄青霉素通过如下制备方法制备得到：

(1)将氨苄青霉素溶于磷酸盐缓冲液中，随后，将N-羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺置入氨苄青霉素溶液中进行反应；