[发明专利]一种β-内酰胺类药物受体蛋白及其应用

权利要求书

1.一种β-内酰胺类药物受体蛋白，其特征在于，所述受体蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。

2.一种β-内酰胺类药物检测试剂盒，所述试剂盒包括盒体、设置在盒体内可拆卸的酶标板和试剂，其特征在于，所述酶标板的每个孔包被有权利要求1所述的受体蛋白；所述试剂包括酶标记的氨苄青霉素、标准溶液、显色液、终止液、洗涤液和样本稀释液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标板通过如下制备方法制备得到：

将所述受体蛋白采用碳酸盐缓冲液稀释至0.5-2μg/ml，并向酶标板的每孔中添加90-110μL所述受体蛋白稀释液，在4℃条件下孵育过夜；随后，将所述受体蛋白稀释液甩干，并以磷酸盐吐温缓冲液洗板2-4次，再将封闭液添加到酶标板中，在35-39℃条件下孵育1.5-2.5h，再将封闭液甩干即得所述酶标板。

4.一种β-内酰胺类药物检测试剂盒，所述试剂盒包括盒体、设置在盒体内可拆卸的酶标板和试剂，其特征在于，所述酶标板的每个孔包被有氨苄青霉素偶联抗原；所述试剂包括酶标记的权利要求1所述的受体蛋白、标准溶液、显色液、终止液、洗涤液和样本稀释液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记的所述受体蛋白为辣根过氧化物酶标记的所述受体蛋白；所述辣根过氧化物酶标记的所述受体蛋白由包括如下步骤制备得到：

(1)将辣根过氧化物酶溶于1％-1.5％戊二醛溶液中室温静置过夜；

(2)将过夜溶液进行洗脱，收集棕色洗脱液、浓缩，缓慢搅拌；

(3)将所述受体蛋白稀释至2-3mg/ml，在搅拌条件下，将所述受体蛋白溶液逐滴加入到浓缩液中得到混合溶液；

(4)向混合溶液中添加碳酸缓冲液，并继续搅拌一段时间，随后，添加赖氨酸溶液并静置；

(5)在搅拌条件下，向静置后的混合溶液中逐滴加入等体积饱和硫酸铵进行反应；

(6)反应结束后，离心收集沉淀物并清洗，再将沉淀物溶于PBS缓冲液、透析、离心收集上清液即得辣根过氧化物酶标记的所述受体蛋白。

6.一种β-内酰胺类药物胶体金检测试纸条，所述检测试纸条包括PVC背板、硝酸纤维素膜、样品垫和吸水垫，其特征在于，所述检测试纸条还包括微孔试剂，所述微孔试剂为含有胶体金标记的权利要求1所述的受体蛋白的塑料微孔；所述硝酸纤维素膜上的检测线采用氨苄青霉素偶联抗原进行制备，质控线采用鼠抗His标签抗体进行制备。

7.根据权利要求6所述的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述微孔试剂由包括如下步骤制备得到：

(1)将胶体金标记的所述受体蛋白进行稀释，再将胶体金标记的所述受体蛋白溶液添加到酶标板中进行包被；

(2)弃去酶标板孔中的包被液，并进行洗板、拍干，随后，向酶标板孔中添加明胶溶液进行封闭；

(3)弃去酶标板孔中的明胶溶液，并进行洗板、拍干、真空干燥即得所述微孔试剂。

8.根据权利要求7所述的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述胶体金标记的所述受体蛋白由包括如下步骤制备得到：

(1)在胶体金溶液中添加碳酸钾溶液；

(2)将所述受体蛋白溶液添加到胶体金溶液中，室温孵育；随后，向孵育后的溶液中添加牛血清白蛋白、混匀，离心收集沉淀物；

(3)采用磷酸盐缓冲液复溶沉淀物，即得胶体金标记的所述受体蛋白。