[发明专利]一种亚精胺合成酶活性测定试剂盒及其方法

说明书

本发明公开了一种亚精胺合成酶活性测定试剂盒及方法，该试剂盒包括试剂一（七水合磷酸氢钠、二水合磷酸二氢钠、水）、试剂二（七水合磷酸氢钠、二水合磷酸二氢钠、β‑巯基乙醇、EDTA、磷酸吡哆醛、水）、试剂三（试剂二、腐胺、脱羧S‑腺苷蛋氨酸）、试剂四（高氯酸、水）、试剂五（氢氧化钠、水）、试剂六（饱和碳酸氢钠）、试剂七（丹磺酰氯、丙酮）、试剂八（氨水）、试剂九（高氯酸、水）、试剂十（亚精胺标准品）；该方法原理为先通过亚精胺合成酶催化腐胺产生亚精胺，再在碱性条件下使亚精胺与丹磺酰氯反应生成具有荧光的衍生物，经过高效液相色谱仪的分离，利用荧光检测器测定亚精胺生成量，从而以此衡量亚精胺合成酶的活性。

技术领域

本发明属于生命科学领域领域，具体涉及一种基于高效液相色谱法的亚精胺合成酶（SPDS）活性测定试剂盒及其方法。

背景技术

多胺是一类小分子生物活性物质，广泛存在于生物体内，与植物的生长发育、衰老及抗逆性都有着密切的联系。目前，在植物中的多胺合成途径已经基本揭示，其生理作用在分子水平上逐步得到阐明。亚精胺合成酶（SPDS）是多胺合成代谢中的一个中间酶。腐胺在亚精胺合成酶的催化下可以生成亚精胺，单位时间内亚精胺的生成量与亚精胺合成酶的活性成正相关，因此亚精胺合成酶的活性可以以亚精胺的生成量来表示，以每分钟催化的腐胺产生1μmol亚精胺所需酶量作为一个酶活力单位(U)，即：1U =1μmol·min^-1的亚精胺。

目前现有的文献中检测亚精胺合成酶活性的方法较少，主要有同位素标记法和均相时间分辨荧光法。同位素标记法，一来标记物价格昂贵且不易制备，二来操作过程复杂；均相时间分辨荧光法，一来由于抗体不通用性以及制备时间较长，整个时间周期很长，价格昂贵，二来易受到交叉反应的干扰；同时，这两种方法对对仪器设备的要求也很高。近些年随着色谱技术的飞速发展，在检测生物体内小分子的应用也越来越广泛，但是现在市面上基于高效液相色谱测定亚精胺合成酶含量的检测技术却鲜有报道。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明旨在提供一种基于高效液相色谱法的亚精胺合成酶活性测定试剂盒及其方法，具有检测灵敏度高，无毒性，操作简便，成本低廉，重复性较好等特点。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

一种亚精胺合成酶活性测定试剂盒，包括以下试剂：

试剂一，液体10mL×1瓶，由Na₂HPO₄·7H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、水组成，4℃保存；

试剂二，液体100mL×1瓶，由Na₂HPO₄·7H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、β-巯基乙醇、EDTA、磷酸吡哆醛、水组成，4℃保存；

试剂三，液体10mL×1瓶，由试剂二、腐胺、脱羧S-腺苷蛋氨酸组成，4℃保存；

试剂四，液体10mL×1瓶，由高氯酸、水组成，4℃保存；

试剂五，液体10mL×1瓶，由NaOH、水组成，4℃保存；

试剂六，液体10mL×1瓶，由饱和NaHCO₃组成，4℃保存；

试剂七，液体15mL×1瓶，由丹磺酰氯、丙酮组成，4℃保存；

试剂八，液体10mL×1瓶，由氨水组成，4℃保存；

试剂九，液体110mL×1瓶，由高氯酸、水组成，4℃保存；

试剂十，亚精胺标准品×1支，-20℃保存。