[发明专利]一种量子点标记免疫球蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种量子点标记免疫球蛋白的方法，首先将量子点活化、清洗备用；将连接臂加入到量子点溶液中，加入双氨基聚乙二醇在20~25℃条件下持续震荡3~5h；得到的反应物清洗后保存在pH7.4的0.05MPB溶液中备用；活化免疫球蛋白后，将得到的反应物溶液加入其中并超声1~3min后，置于20~25℃条件下持续震荡3~5h；反应液中加入封闭剂，20~25℃条件下持续震荡1~2h，离心，弃上清，得到量子点‑连接臂‑免疫球蛋白偶联物，保存在4℃备用。本发明利用连接臂将免疫球蛋白和量子点进行偶联，通过连接臂的长度可以有效的避免量子点和免疫球蛋白的位阻效应，大大提高免疫球蛋白的反应活性；利用本发明的偶联物进行免疫检测时可以大大提高产品的敏感性和稳定性。

技术领域

本发明涉及纳米生物技术，尤其是涉及一种量子点标记免疫球蛋白的方法 。

背景技术

量子点（QDs）是一种零维半导体纳米晶体，近似球形，直径1-12nm。量子点具有灵敏度高，稳定性好，激发光谱宽，发射峰窄，荧光寿命长和较大的斯托克斯位移等优势，是新一代荧光标记探针的最佳选择。

目前在蛋白质上偶联量子点应用于免疫检测的实用技术已达到广泛应用。2009年张国华等在《食品科学》（2009，vol.30.No.12P254-257）发表了用水溶性量子点标记莱克多巴胺抗体的方法。2010年胡华军等在《分析化学》（2010，vol.38.No.12P1727-1731）发表了量子点标记克伦特罗抗体的方法。申请号为201210431798.6的中国专利“一种量子点标记蛋白的方法”描述了在蛋白上表达一个组氨酸标签序列（Histag），然后将带组氨酸标签的蛋白与量子点混合，得到量子点标记的复合物。申请号为201310485455.2的中国专利“一种量子点标记免疫球蛋白的方法”描述的是将免疫球蛋白通过量子点的羧基经过EDC缩合直接偶联在量子点表面。

上述几种量子点偶联蛋白质的方法中有一个共性，就是通过EDC活化量子点表面羧基后直接偶联免疫球蛋白，这种偶联方法是通过缩合反应将免疫球蛋白直接连接在量子点表面上，二者之间几乎没有物理距离。由于空间位阻作用，很多免疫球蛋白的反应活性由于没有物理距离而无法发挥，使得偶联物量子点-免疫球蛋白利用率不高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能提高偶联物活性的量子点标记免疫球蛋白的方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的量子点标记免疫球蛋白的方法，是利用连接臂对所述量子点和免疫球蛋白进行偶联，其具体步骤为：

第一步，将量子点活化、清洗，保存于pH7.4的0.05M PB（磷酸盐）溶液中备用；

第二步，将连接臂加入到第一步的量子点溶液中，并按照量子点:双氨基聚乙二醇=1:1之比例加入双氨基聚乙二醇在20~25℃条件下持续震荡3~5h,进行反应；

第三步，将第二步得到的反应物清洗后保存在pH7.4的0.05MPB（磷酸盐）溶液中备用；

第四步，活化免疫球蛋白后，将第三步得到的溶液加入其中并超声1~3min后，置于20~25℃条件下持续震荡3~5h,进行反应；

第五步，将第四步的反应液中加入封闭剂，20~25℃条件下持续震荡1~2h，离心，弃上清，得到量子点-连接臂-免疫球蛋白偶联物，保存在4℃备用。

所述第四步活化免疫球蛋白时，需要将EDC（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺）、NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）、免疫球蛋白按2~4: 2~4:1~5（质量比）之比例同时溶解在pH5.5的0.05M MES（2-（N-吗啉）乙磺酸一水合物）中，2~8℃条件下持续震荡1~2h。

所述EDC、NHS、免疫球蛋白之间的比例为2: 4:1。

所述连接臂为两端修饰有氨基的聚合物。