[发明专利]一种快速、低成本从鸡血中分离PCR模板的方法

说明书

本发明公开了一种快速、低成本从鸡血中分离PCR模板的方法，步骤是：A、从血样中分离血细胞核：向1.5mL EP管中加入新鲜、冷冻的抗凝鸡血样品，4000rpm离心1分钟去上清；向管中加入500μl灭菌水，静置1分钟，9500rpm离心3分钟，弃上清；B、裂解细胞核：使用剪去枪头尖部的枪头向沉淀中加入200μl灭菌水摇匀的3－4％螯合型离子交换树脂溶液，混匀后，55－57℃水浴30分钟，再放入干热仪，100℃加热8分钟；C、PCR模板分离：9500rpm离心2分钟，取上清作为PCR模板。该法所获取的PCR模板与现有的传统DNA提取方法获得模板在用于PCR技术检测具有同等功效，操作上更加简单易行、耗时短(1小时以内)、成本低(约0.31元/样)，适用于利用PCR技术进行的各种快速DNA分子检测实验。

技术领域

本发明属于核酸快速提取技术领域，尤其涉及快速、低成本 从鸡血中分离PCR模板(DNA)的方法，可以快速、低成本从鸡 血中分离出DNA作为PCR模版用于各种快速DNA分子检测的实 验。

背景技术

随着分子生物学技术的高速发展，各种DNA分子检测技术已 逐步运用到医学、农业、环境及生物学等领域。目前在农业领域， PCR扩增技术已经广泛应用于育种或疾病诊断工作中，可检测的特 定疾病以及相关性状等的关联基因。在这些工作中有些需要进行 快速鉴定或诊断、有些实验需进行大量样本检测；但利用PCR检 测时模板DNA的分离时间与成本严重制约这类技术的广泛使用， 因此如何快速、低成本分离PCR模板(DNA)是提高这类技术使 用效率的关键。采集血样具有不杀死动物、经济实用且易获取等 优点，在实际操作中常从动物血液中提取DNA。

传统苯酚氯仿法是目前提取血液DNA的常用方法，这种方法 需要蛋白酶K较长时间消化处理血样，具有耗时长、实验试剂毒 性大，操作过程复杂等缺点。而市面上相关的商业化试剂盒方法 提取DNA的方法费用相对较高，且提取的DNA纯度和浓度都较低， 因此容易降解不易长期保存利用，存放较长时间后就无法作为模 板进行下游PCR扩增反应。本专利使用的螯合型离子交换树脂溶 液是一种聚苯乙烯基体离子交换树脂和灭菌水配置的，它可以高 与二价金属离子螯合，避免金属离子在高温和低离子强度溶液中 活化DNA酶使DNA降解。另外，其悬液在碱性环境和100℃高温 条件下可使包裹DNA的蛋白质变性从而从细胞核中释放DNA。在 当前的PCR检测实践中，采用传统的DNA提取方法耗时长，不足 以满足更有效、快速地获取PCR模板的需求。为了更快速、低成 本地大批量从鸡血中分离PCR模板(DNA)，申请人在借鉴和改进 前人工作的基础上，筛选出了一种螯合型离子交换树脂裂解细胞 核并建立了一种可以快速、低成本从鸡血中获取PCR模板的方法， 所获取的PCR模板(DNA)与现有的传统DNA提取方法获得模板 在用于PCR技术检测具有同等功效，经检索未发现一种快速、低 成本从鸡血中分离PCR模板(DNA)的方法公开或使用。

发明内容

鉴于上述情况中现有技术存在的问题，本发明的目的是在于 提供了一种快速、低成本从鸡血中分离PCR模板(DNA)的方法， 所获取的PCR模板(DNA)与现有的传统DNA提取方法具有同等 功效的同时，本方法操作步骤更简单、易于操作、耗时极短，提 取过程高效，试剂材料用量少，成本更加低廉。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

本发明的提取方法基于螯合型离子交换树脂溶液从鸡血样品 快速、低成本地分离PCR模板(DNA)。

一种快速、低成本从鸡血中分离PCR模板(DNA)的方法， 其步骤是：

A、从血样中分离血细胞核：向1.5mL EP管中加入10－20μl 新鲜、冷冻(需解冻)的抗凝鸡血样品，4000rpm离心1分钟去 上清；向管中加入500μl灭菌水，静置一分钟，9500rpm离心2 －4分钟，弃上清；