[发明专利]利用基因编辑系统筛选低免疫细胞系的SuperH细胞母系、其构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种利用基因编辑系统筛选低免疫细胞系的SuperH细胞母系、其构建方法及其应用。其中，该SuperH细胞母系是由H9细胞系转入HESPer基因元件形成，HESPer基因元件包括有效连接的第一启动子、HLA‑E基因、Sr39tk基因、第一终止子、loxP序列、第二启动子、筛选基因和第二终止子。应用本发明的技术方案，使用本发明所构建的SuperH细胞系，结合基因编辑系统(例如CRISPR/Cas9基因编辑系统)，可以一次实验对多基因进行调控表达。

技术领域

本发明涉及细胞系工程改造和分子检测领域，具体而言，涉及一种利用基因编辑系统筛选低免疫细胞系的SuperH细胞母系、其构建方法及其应用。

背景技术

干细胞治疗是通过体外分离或体细胞诱导获得干细胞系，再经定向诱导分化等实验步骤，培养获得的全新的、正常的、更年轻的细胞、组织、器官等，后再移植至体内，代替非正常或死亡的细胞，从而恢复机体功能，达到治疗目的的疗法。干细胞的移植具有广泛的应用，一般能治疗神经系统疾病、免疫系统疾病和其他内外科疾病。干细胞还可以在肝脏部位分泌细胞因子，促进机体的自我修复。但是，干细胞在转移至体内的时候存在着人体免疫系统排斥反应，为了消除这一负面影响，需要构建出低免疫和广适用的细胞系来促进干细胞治疗疗法的发展。现在的研究进展更多的是集中在单一基因影响细胞的免疫性和可用性开发上，难以解决复杂多样的疾病问题。

发明内容

本发明旨在提供一种利用基因编辑系统筛选低免疫细胞系的SuperH细胞母系、其构建方法及其应用，以实现一次实验对多基因进行调控表达。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种利用基因编辑系统筛选低免疫细胞系的SuperH细胞母系。该SuperH细胞母系是由H9细胞系转入HESPer基因元件形成， HESPer基因元件包括有效连接的第一启动子、HLA-E基因、Sr39tk基因、第一终止子、loxP 序列、第二启动子、筛选基因和第二终止子。

进一步地，HESPer基因元件还包括有效连接的增强子，第一启动子不同于第二启动子，第一终止子不同于第二终止子。

进一步地，增强子为CMV增强子。

进一步地，第一启动子为EF1启动子，第一终止子为rb球蛋白聚腺苷酸终止子，第二启动子为PGK启动子，第二终止子为SV40终止子，筛选基因为Bla基因。

进一步地，HESPer基因元件具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸系列。

进一步地，HESPer基因元件插入质粒pHS-AAVS1后转入H9细胞系。

根据本发明的另一方面，提供了一种利用基因编辑系统筛选低免疫细胞系的SuperH细胞母系的构建方法。该构建方法包括以下步骤：S1，构建HESPer基因元件，HESPer基因元件包括依次有效连接的第一启动子、HLA-E基因、Sr39tk基因、第一终止子、loxP序列、第二启动子、筛选基因和第二终止子，其中第一启动子不同于第二启动子，第一终止子不同于第二终止子；S2，将HESPer基因元件连接至质粒；S3，利用基因编辑系统将HESPer基因元件敲入H9细胞系的AAVS1位点上，并利用筛选基因筛选获得SuperH细胞母系。

进一步地，HESPer基因元件还包括有效连接的增强子，优选的，增强子为CMV增强子。

进一步地，第一启动子为EF1启动子，第一终止子为rb球蛋白聚腺苷酸终止子，第二启动子为PGK启动子，第二终止子为SV40终止子，筛选基因为Bla基因。

进一步地，HESPer基因元件具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸系列。

进一步地，HESPer基因元件插入质粒pHS-AAVS1后转入H9细胞系，基因编辑系统为CRISPR/Cas9基因编辑系统。