[发明专利]双基因修饰的骨髓间充质干细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种双基因修饰的骨髓间充质干细胞，其特征是CX3CR1&IL-25双基因修饰的大鼠的原代骨髓间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述双基因修饰的骨髓间充质干细胞，其特征是该间充质干细胞不仅仅限于大鼠的原代骨髓间充质干细胞，此处的动物为大鼠，小鼠，豚鼠，驯养动物为兔子，猫，狗，牛，羊，猪，马，灵长类动物为猴子和人。

3.根据权利要求1所述双基因修饰的骨髓间充质干细胞，其特征是该间充质干细胞不仅仅限于骨髓来源，还可以为脂肪组织、滑膜组织、肺组织、脐带血或外周血来源的间充质干细胞。

4.根据权利要求1所述双基因修饰的骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征是由以下步骤构成：

i.将四周龄的SPF级Sprague-Dawley雄性大鼠，麻醉处死后，浸泡在75％酒精30s，于超净工作台中分离出股骨和胫骨；

ii.沿纵向剪开股骨和胫骨，用条件培养基，即低糖DMEM培养基：10％胎牛血清，100U/mL青霉素，100mg/mL链霉素，1％HEPES，1％非必需氨基酸，冲出骨髓内容物，反复冲洗两次；

iii.70μm的筛网过滤后，4℃，1000rpm，离心5分钟；

iv.弃上清，加入5mL预冷的红细胞裂解液，冰上裂解3分钟；

v.4℃，1000rpm，离心5分钟；

vi.加入8mL条件培养基，制备成细胞悬液；

vii.将细胞悬液加入75cm²细胞培养瓶中，置于5％CO₂，37℃恒温培养箱中；

viii.前3天，每隔8小时，换一次新鲜的条件培养基，第4至第14天，每隔3天，换一次新鲜的条件培养基；

ix.以感染复数为5:1，加入高表达CX3CR1和IL-25慢病毒转染间充质干细胞，最后得到CX3CR1&IL-25-LV-MSC。

5.根据权利要求4所述双基因修饰的骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征是步骤Ⅸ中高表达CX3CR1和IL-25的慢病毒为能转录表达小鼠来源的CX3CR1和IL-25蛋白的慢病毒，针对间充质干细胞用于不同动物的治疗而言，此处高表达CX3CR1和IL-25慢病毒能转录表达的蛋白来源为：小鼠，大鼠，豚鼠，驯养动物为兔子，猫，狗，牛，羊，猪，马，灵长类动物为猴子或人。

6.权利要求1所述双基因修饰的骨髓间充质干细胞在制备治疗炎症疾病药物中的应用。

7.权利要求1所述双基因修饰的骨髓间充质干细胞在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。