[发明专利]一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒

说明书

本发明提供一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒以布鲁氏菌wzt重组蛋白为包被抗原。本发明的试剂盒能够高敏感以及高特异的检测布鲁氏菌，能够用于布鲁氏菌的诊断和科学研究。

技术领域

本发明属于基因工程技术和诊断试剂技术领域，具体涉及一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒。

背景技术

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种可以感染人和家畜的人畜共患病，家畜中主要感染牛、羊、猪、犬，其中牛和羊的感染情况最为严重，动物患病会引起怀孕动物流产、产奶下降、不育等症状，人患病会出现关节疼痛、全身困乏、发热等症状。布鲁氏菌病的传播给畜牧业和人类健康带来很大的危害，全世界每年新发感染人数大约为50万人，除少数发达国家外，有170多个国家存在布鲁氏菌病。感染布鲁氏菌病主要是与患病动物尤其是患病的妊娠动物、未加工的肉制品或是乳制品接触。

布鲁氏菌的致病机制是其能够在宿主单核巨噬细胞中生存，即使在低氧、营养不足、酸性环境、和存在氧化物的条件下仍能生存。并且布鲁氏菌是胞内寄生菌，一旦感染难以通过抗生素治疗。即使感染动物自愈，仍有持续排菌的危险。

在布鲁氏菌病诊断方面，ELISA试剂盒具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简单、结果易于判定等优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，能够用于布鲁氏菌病抗体的定性检测，具有特异性强、敏感性高、重复性好、易于操作的优点。

本发明提供一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒以布鲁氏菌wzt重组蛋白为包被抗原。

作为优选，所述重组蛋白的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2。

作为优选，所述重组蛋白的制备方法为：将布鲁氏菌wzt基因片段克隆至pET30a(+)表达载体的多克隆位点处，获得重组质粒pET-30a-wzt，将重组质粒pET-30a-wzt转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达，收集上清液进行纯化，得到纯化后的重组蛋白。

作为优选，所述试剂盒还包括封闭液，所述封闭液为Casein。

作为优选，所述试剂盒还包括包被缓冲液，所述包被缓冲液为0.025M pH9.6的碳酸盐缓冲液。

作为优选，所述试剂盒还包括血清稀释液，所述血清稀释液为Casein。

作为优选，所述试剂盒还包括酶标二抗，所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的鼠抗羊IgG酶标抗体。

本发明还提供上述试剂盒在检测布鲁氏菌中的应用，所述应用不以疾病的诊断和治疗为目的。

本发明还提供上述布鲁氏菌的间接ELISA检测方法，所述检测方法不以疾病的诊断和治疗为目的，步骤如下：

(1)包被酶标板：将纯化后的权利要求1-3任一项中所述的pET-30a-wzt重组蛋白包被微孔板；包被浓度为15μg/mL；包被条件为4℃包被过夜；

(2)封闭酶标板；所述封闭为于37℃封闭3h，封闭时的封闭液为Casein；

(3)加入稀释后的待检血清，于37℃反应1h；所述稀释为将待检血清用血清稀释液以1:80进行稀释；

(4)加入稀释后的酶标二抗，于37℃反应30min或90min；所述稀释为将酶标二抗用酶标二抗稀释液以1:5000进行稀释；

(5)显色，终止，并在酶标仪上读取OD₄₅₀nm值。

本发明的试剂盒能够高敏感以及高特异的检测布鲁氏菌，能够用于布鲁氏菌病抗体的定性检测，具有特异性强、敏感性高、重复性好、易于操作的优点。还能够用于布鲁氏菌的诊断和科学研究。