[发明专利]一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒

权利要求书

1.一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒以布鲁氏菌wzt重组蛋白为包被抗原。

2.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述重组蛋白的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2。

3.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述重组蛋白的制备方法为：将布鲁氏菌wzt基因片段克隆至pET30a(+)表达载体的多克隆位点处，获得重组质粒pET-30a-wzt，将重组质粒pET-30a-wzt转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达，收集上清液进行纯化，得到纯化后的重组蛋白。

4.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括封闭液，所述封闭液为Casein。

5.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括包被缓冲液，所述包被缓冲液为0.025M pH9.6的碳酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括血清稀释液，所述血清稀释液为Casein。

7.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括酶标二抗，所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的鼠抗羊IgG酶标抗体。

8.权利要求1-7任一项所述的试剂盒在检测布鲁氏菌中的应用，所述应用不以疾病的诊断和治疗为目的。

9.布鲁氏菌的间接ELISA检测方法，所述检测方法不以疾病的诊断和治疗为目的，其特征在于：步骤如下：

(1)包被酶标板：将纯化后的权利要求1-3任一项中所述的pET-30a-wzt重组蛋白包被微孔板；包被浓度为15μg/mL；包被条件为4℃包被过夜；

(2)封闭酶标板；所述封闭为于37℃封闭3h，封闭时的封闭液为Casein；

(3)加入稀释后的待检血清，于37℃反应1h；所述稀释为将待检血清用血清稀释液以1:80进行稀释；

(4)加入稀释后的酶标二抗，于37℃反应30min或90min；所述稀释为将酶标二抗用酶标二抗稀释液以1:5000进行稀释；

(5)显色，终止，并在酶标仪上读取OD₄₅₀nm值。