[发明专利]一种血浆人免疫球蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种血浆人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，采用A方法或B方法；

所述A方法包括如下步骤：

（1）血浆去除冷沉淀；

（2）经过DEAE Sephadex A50凝胶吸附的血浆经杂质吸附，进行Heparin亲和层析进入下一步处理；

（3）FI+FII+FIII沉淀，杂质吸附，复溶；

（4）FII沉淀，杂质吸附，复溶；

（5）复溶后FII上清经杂质吸附，层析；

（6）超滤浓缩，除菌配制；

（7）低pH孵育；

A方法中，步骤（2）所述的Heparin亲和层析，通过装填有Heparin配基的亲和凝胶的层析柱进行固定床亲和层析；所述Heparin配基的亲和凝胶，为Capto Heparin、HeparinSepharose Fastflow、TOYOPEARL AF-Heparin HC-650F中的一种；步骤（2）中杂质吸附采用带强阳离子电荷的Zeta Plus ZB系列（30~120）的吸附材质；

A方法中，步骤（5）中杂质吸附采用带强阳离子电荷的Zeta Plus ZB系列（30~120）的吸附材质；步骤（5）中层析采用阴离子交换层析，阴离子交换层析为：填装阴离子凝胶的层析柱进行固定床层析；

所述B方法包括如下步骤：

（1）血浆去除冷沉淀；

（2）FI+FII+FIII沉淀，杂质吸附，复溶；

（3）FII沉淀，杂质吸附，复溶；

（4）复溶后FII上清经杂质吸附，层析；

（5）超滤浓缩，除菌配制；

（6）低pH孵育；

B方法中，步骤（4）中杂质吸附采用带强阳离子电荷的Zeta Plus ZB系列（30~120）的吸附材质；层析采用阴离子交换层析和Heparin 亲和凝胶层析；

所述阴离子交换层析和Heparin 亲和凝胶层析为：采用填装混合有阴离子凝胶和Heparin亲和凝胶的层析柱进行固定床层析。

2.根据权利要求1所述的一种血浆人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，A方法中，步骤（2）中DEAE Sephadex A50凝胶吸附后的血浆经过杂质吸附后进行Heparin亲和层析，收集流穿和洗涤的血浆，进行下一步处理。

3.根据权利要求1所述的一种血浆人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，A方法中，步骤（2）中使用注射用水对吸附材质进行清洗，再用含100~200m NaCl，10~50mM Na₂HPO₄，pH6.5~7.5的溶液对吸附材质进行清洗，用量为50~150L/m²；冲洗完成后排干设备内的溶液并用压缩空气吹干，用于杂质吸附。

4.根据权利要求1所述的一种血浆人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，A方法中，步骤（2）杂质吸附后的血浆通过0.2μm的滤芯过滤上样，上样完成后再用平衡液将层析柱中未吸附的其他血浆成分洗涤干净；收集流穿液和洗涤液进入下一步人免疫球蛋白的生产；

每次上样量为20~30个柱床体积；所述的平衡液：含磷酸氢二钠10~30mmol/L、氯化钠0.3~0.6mol/L，pH6.50~7.50；平衡、上样和洗脱线流速60cm/h~300cm/h；柱再生：分别用0.1mol/L氢氧化钠、洗脱液、注射用水进行处理，所述的洗脱液：含磷酸氢二钠10~30mmol/L、氯化钠1.5~2.5mol/L，pH6.50~7.50；柱保存：20%乙醇溶液保存。

5.根据权利要求1所述的一种血浆人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，A方法中，步骤（5）使用注射用水对吸附材质进行清洗，再用含5~15mM Na₂HPO₄，pH6.5~7.5的溶液对吸附材质进行清洗，用量为50~150L/m²；冲洗完成后排干设备内的溶液并用压缩空气吹干吸附材质，用于杂质吸附。