[发明专利]一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。本发明具有快速检测、灵敏度高、特异性强、线性范围宽、稳定性好、试剂用量小、成本低、操作简便，对使用人员要求低的优点。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，尤其涉及一种犬CRP的检测试剂盒。

背景技术

机体在受到细菌感染或组织损伤等刺激时，会出现急性期反应，受到刺激的细胞会释放促炎因子，促进肝脏合成一些急性期反应蛋白，并从肝细胞中分泌至血液。C反应蛋白(C-neactveprotein ,简称CRP)是犬最主要的，也是很敏感的急性时相反应蛋白。在钙离子存在时CRP与肺炎球菌C-多糖起沉淀反应形成复合物，在动物遭受细菌感染或者组织伤时，血清中一些急剧上升的蛋白质（如急性蛋白CRP），激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞。

CRP在机体的免疫反应方面有着积极作用，在很多病症中会出现显著变化。CRP在炎症发生后数小时就开始升高，48小时可以到达顶峰，在疾病恢复期迅速下降。CRP升高的程度反应炎症的大小或活动性，在急性炎症和感染时CRP与疾病活动性有良好的相关性，CRP值可为快速决定提供一种方法。因此，CRP可以作为急性感染和炎症性疾病的一种标志，在疾病早期检测犬CRP值对犬做出正确的诊断及其重要。

常用的CRP检测方法多种多样，主要有乳胶免疫比浊法、放射免疫测定、ELISA法及化学发光法等。乳胶免疫比浊法是利用抗原抗体反应形成免疫复合物，产生的浊度与CRP含量呈正比，用比浊法进行测定，从而求得CRP的含量，此方法灵敏度和线性无法兼顾。ELISA法稳定性好，但操作步骤繁琐、反应时间长且检测灵敏度较低。放射免疫测定灵敏度高，但弊端较大，如会存在放射性同位素损伤、污染及不稳定等，且容易对操作人员造成伤害。

目前测试人CRP含量的试剂盒已相对较为成熟和稳定，但测试犬CRP含量的ELISA试剂盒，操作步骤繁琐、反应时间长、检测灵敏度较低且试剂使用量大，对使用人员要求高。面对日益庞大的宠物市场，简便、迅速、准确检测犬CRP含量的会成为主流方向。

发明内容

为解决上述现有技术的不足，本发明提供了一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒具有快速检测、灵敏度高、特异性强、线性范围宽、稳定性好、试剂用量小、成本低、操作简便，对使用人员要求低的优点。

为了达到上述技术目的，本发明所采用的技术方案是：

一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。

所述毛细管为高精度毛细管，其外径为1.2±0.02mm，内径为0.7±0.005m，长度为30±1mm，材质为高硼硅3.3玻璃。

所述犬CRP单克隆抗体包被的毛细管是通过采用犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管或者采用犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管的方法来制备的。

所述犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管具体步骤如下：

制取包被液：在50M的MES缓冲液中加入EDC和犬CRP单克隆抗体混匀后，得到包被液Ⅰ；包被液Ⅰ中，EDC的浓度为5～400ug/mL，犬CRP单克隆抗体的浓度为2～10ug/mL；

包被：将表面氨基化的毛细管浸泡在包被液Ⅰ中进行包被，包被温度为室温，包被时间为20～40min；

清洗：将包被后的毛细管用pH=7.4的50mM的Tris～HCl溶液淋洗并吹干。

所述MES缓冲液包括如下成分：