[发明专利]一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒

权利要求书

1.一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：包括犬CRP单克隆抗体包被的毛细管、碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物和清洗液。

2.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述犬CRP单克隆抗体包被的毛细管是通过采用犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管或者采用犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管的方法来制备的。

3.根据权利要求2所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述犬CRP单克隆抗体EDC一步法包被毛细管具体步骤如下：

制取包被液：在MES缓冲液中加入EDC和犬CRP单克隆抗体混匀后，得到包被液Ⅰ；包被液Ⅰ中，EDC的浓度为5～400ug/mL，犬CRP单克隆抗体的浓度为2～10ug/mL；

包被：将表面氨基化的毛细管浸泡在包被液Ⅰ中进行包被，包被温度为室温，包被时间为20～40min。

4.根据权利要求2所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述犬CRP单克隆抗体SMCC包被毛细管具体步骤如下：

活化犬CRP单克隆抗体：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL～5mg/mL，并用2-IT活化犬CRP单克隆抗体；

活化毛细管：将表面氨基化的毛细管浸泡在SMCC中进行活化处理，浸泡时间为1.5h，浸泡温度为室温；

包被：将活化后的犬CRP单克隆抗体用pH=7.4的TSE溶液稀释至10ug/mL，制成包被液Ⅱ，将活化后的毛细管浸泡在包被液Ⅱ中进行包被，包被时间为12～24h，包被温度为4℃；

封闭：用Tris～HCl溶液浸泡封闭包被后的毛细管，封闭温度为37℃，封闭时间为3h，封闭完成后用清洗液淋洗并吹干，所述Tris～HCl溶液中含有2%的BSA和0.1M的甘氨酸。

5.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体通过如下方法制成：

犬CRP单克隆抗体活化：将犬CRP单克隆抗体浓缩至3mg/mL～5mg/mL，并用2-IT进行活化处理；

碱性磷酸酶活化：将碱性磷酸酶浓缩至2mg/mL～4mg/mL，并用SMCC进行活化处理；

混合：将活化后的碱性磷酸酶和犬CRP单克隆抗体的按照摩尔比例为1.2:1混合，并加入1/500犬CRP单克隆抗体体积的1M的MgCl₂溶液，在温度为4℃的条件下，反应12～24h后，加入终止剂终止反应，终止反应后，进行纯化处理，得到碱性磷酸酶标记的犬CRP单克隆抗体。

6.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物为AMPPD或APS-5。

7.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述清洗液通过如下方法配置：

在pH=7.4的50mM 的Tris～HCl溶液中加入氯化钠、CHAPS和曲拉通，溶解后即可得到清洗液，清洗液中，氯化钠的质量百分浓度为0.9%，CHAPS的质量百分浓度为0.1%，曲拉通的质量百分浓度为0.1%。

8.根据权利要求1所述的一种犬CRP的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：还包括CRP系列校准品，所述犬CRP系列校准品通过如下方法配置：

CRP校准品的浓度分别为6.25 ug/mL、12.5ug/mL、25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL和200ug/mL。