[发明专利]酵母DNA的保真存储方法在审
| 申请号： | 201811249175.0 | 申请日： | 2018-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN109402111A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 宁康;李锐豪;陈超云;朱雪 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学鄂州工业技术研究院;华中科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人： | 黄君军 |
| 地址： | 436044 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 离心管 紫外光 酵母DNA 上层 混合液 振荡 保真 混匀 氯仿 冷冻 存储 饱和苯酚 酵母样本 离心清洗 时间选择 信息存储 重悬菌体 提取DNA 保真度 玻璃珠 保存 补加 冷藏 损伤 | ||
1.一种酵母DNA的保真存储方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、珠磨法提取样本中的DNA：将酵母样本溶液于离心管离心，用TE缓冲液重悬菌体，离心清洗，收集的菌体用TE缓冲液悬起后加玻璃珠，再加Tirs饱和苯酚，得到的混合液振荡5-10min，冷冻，离心；吸取上层水相转移至一个新的离心管中，加TE缓冲液、氯仿混匀后冷藏，再离心；转移上层水相至一个新的离心管中，补加TE缓冲液和RNase消化，加入氯仿混匀，冷冻，离心；转移上层水相至一个新的离心管中，至此，上层水相中即含有纯化好的酵母基因组DNA；
步骤2、将纯化好的酵母基因组DNA于紫外光下、温度为15℃～25℃、pH为7～8的条件下保存。
2.如权利要求1所述酵母DNA的保真存储方法，其特征在于，所述步骤1中，取样本溶液于离心管，离心转速为8000g，离心时间为6min。
3.如权利要求1所述酵母DNA的保真存储方法，其特征在于，所述步骤1中，所述玻璃珠直径为425-600um。
4.如权利要求1所述酵母DNA的保真存储方法，其特征在于，所述步骤1中，得到的混合液在漩涡振荡器上振荡后，于放置4℃冰箱冷冻6min，13000g，离心6min。
5.如权利要求1所述酵母DNA的保真存储方法，其特征在于，所述步骤1中，吸取上层水相转移至一个新的离心管时，加TE缓冲液、氯仿混匀后，于4℃冰箱冷藏5min，13000g，离心10min，重复此步骤两到三次。
6.如权利要求1所述酵母DNA的保真存储方法，其特征在于，所述步骤1中，转移上层水相至一个新的离心管时，补加TE缓冲液和10mg/ml RNase，37℃消化13min。
7.如权利要求1所述酵母DNA的保真存储方法，其特征在于，所述步骤1中，RNase消化后加入氯仿混匀，于4℃冰箱冷冻5min，13000g，离心5min。
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