[发明专利]一种用于获取抗体序列的扩增引物和获取抗体序列的方法

说明书

本发明公开了一种用于获取抗体序列的扩增引物和获取抗体序列的方法，涉及抗体技术领域。该扩增引物包括如下引物对中的任意一种或两种：重链引物对和轻链引物对，重链引物对包括：重链上游引物和重链下游引物，轻链引物对包括：轻链上游引物和轻链下游引物。该扩增引物可以直接以来自分泌抗体的细胞的基因组DNA为模板进行扩增，得到抗体可变区基因序列，进而确定抗体的可变区序列，具有方便、快速、节约成本、人力及时间，结果可靠等特点。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种用于获取抗体序列的扩增引物和获取抗体序列的方法。

背景技术

现有的单克隆抗体序列获取的方法是：首先提取分泌抗体的细胞 (杂交瘤细胞，B细胞等)的RNA，然后进行反转录，通过设计简并引物进行序列扩增，或采用5′RACE方法对序列进行扩增，进一步对扩增产物进行克隆及Sanger测序获得抗体序列。亦可以通过抗体的氨基酸测序获得抗体的序列信息，再经过基因合成获得抗体序列。

现有方法首先进行细胞的RNA提取操作，RNA的特点是易降解，不如DNA稳定。提取RNA后，再进行反转录，以cDNA为模板使用简并引物或者5′RACE方法进行扩增。步骤繁琐，失败率较高，且成本也较高。

抗体氨基酸测序方法的缺点：价格昂贵，实验周期较长。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于获取抗体序列的扩增引物，该扩增引物可以直接以来自分泌抗体的细胞的基因组DNA为模板进行扩增，得到抗体可变区基因序列，进而确定抗体的可变区序列，具有操作方便、快速，节约成本、人力及时间，结果可靠等特点。

本发明的另一目的在于提供获取抗体序列的方法，该方法直接以来自分泌抗体的细胞的基因组DNA为模板进行扩增，得到抗体可变区基因序列，进而确定抗体的可变区序列，具有操作方便、快速，节约成本、人力及时间，结果可靠等特点。

本发明的另一目的在于提供试剂盒，该试剂盒可以用于鉴定抗体的序列。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供了一种用于获取抗体序列的扩增引物，其包括如下引物对中的任意一种或两种：重链引物对和轻链引物对；

其中，重链引物对包括：重链上游引物和重链下游引物；

所述重链上游引物的互补结合区位于涵盖重链V基因的上游部分序列和所述重链V基因的5’端部分序列的区域中，所述重链下游引物的互补结合区位于涵盖重链J基因和位于所述重链J基因与重链 C基因间的内含子的区域中；

轻链引物对包括：轻链上游引物和轻链下游引物；

轻链上游引物的互补结合区位于涵盖轻链V基因的上游部分序列和所述轻链V基因的5’端部分序列的区域中，所述轻链下游引物的互补结合区位于涵盖轻链J基因和位于所述轻链J基因与轻链C基因间的内含子的区域中。

抗体的产生经过了基因重排(见图1)，在胚系基因组上，抗体基因片段具有多样性，而经过V,D,J基因重排，最终形成的抗体仅包含其中每种基因簇中的一个基因片段，且J基因相对数量较少可作为引物设计的位点。同时J基因与C基因之间的intron序列是保守的，这段intron序列则可作为保守位点来设计扩增抗体V区的引物。

本发明首次提出将扩增引物的下游引物设计位置选在J基因上或J基因与C基因中间的内含子(intron)上，对扩增产物进行序列分析，从而获得编码单克隆抗体可变区的基因编码序列信息，该扩增引物可通过直接以基因组DNA为模板进行抗体序列扩增，避免了提取RNA和反转录的步骤，提高获取抗体序列的效率，有利于降低成本，具有操作方便、快速，节约成本、人力及时间，结果可靠等特点。