[发明专利]一种用于获取抗体序列的扩增引物和获取抗体序列的方法在审
| 申请号： | 201811245491.0 | 申请日： | 2018-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN109295051A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 程晓东 | 申请（专利权）人： | 程晓东;杭州来伯生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/13;C12N15/10;C12Q1/6876 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李进 |
| 地址： | 054000 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗体序列 扩增引物 轻链引物 上游引物 下游引物 重链引物 抗体 轻链 重链 抗体可变区基因 可变区序列 基因组DNA 抗体技术 扩增 引物 分泌 细胞 节约 | ||
1.一种用于获取抗体序列的扩增引物，其特征在于，其包括如下引物对中的任意一种或两种：重链引物对和轻链引物对；
其中，重链引物对包括：重链上游引物和重链下游引物；
所述重链上游引物的互补结合区位于涵盖重链V基因的上游部分序列和所述重链V基因的5’端部分序列的区域中，所述重链下游引物的互补结合区位于涵盖重链J基因和位于所述重链J基因与重链C基因间的内含子的区域中；
轻链引物对包括：轻链上游引物和轻链下游引物；
轻链上游引物的互补结合区位于涵盖轻链V基因的上游部分序列和所述轻链V基因的5’端部分序列的区域中，所述轻链下游引物的互补结合区位于涵盖轻链J基因和位于所述轻链J基因与轻链C基因间的内含子的区域中。
2.根据权利要求1所述的扩增引物，其特征在于，所述重链下游引物的互补结合区位于所述重链J基因与重链C基因间的内含子区域中；
所述轻链下游引物的互补结合区位于所述轻链J基因与轻链C基因间的内含子区域中。
3.根据权利要求1或2所述的扩增引物，其特征在于，所述重链上游引物为简并引物。
4.根据权利要求1或2所述的扩增引物，其特征在于，所述轻链上游引物为简并引物。
5.一种获取抗体序列的方法，其特征在于，其包括：使用如下引物对中的任意一种进行PCR扩增：重链引物对和轻链引物对；
重链引物对包括：重链上游引物和重链下游引物；
其中，重链引物对包括：重链上游引物和重链下游引物；
所述重链上游引物的互补结合区位于涵盖重链V基因的上游部分序列和所述重链V基因的5’端部分序列的区域中，所述重链下游引物的互补结合区位于涵盖重链J基因和位于所述重链J基因与重链C基因间的内含子的区域中；
轻链引物对包括：轻链上游引物和轻链下游引物；
轻链上游引物的互补结合区位于涵盖轻链V基因的上游部分序列和所述轻链V基因的5’端部分序列的区域中，所述轻链下游引物的互补结合区位于涵盖轻链J基因和位于所述轻链J基因与轻链C基因间的内含子的区域中。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述重链下游引物的互补结合区位于所述重链J基因与重链C基因间的内含子区域中；
所述轻链下游引物的互补结合区位于所述轻链J基因与轻链C基因间的内含子区域中。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述重链上游引物为简并引物。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述轻链上游引物为简并引物。
9.根据权利要求5-8任一项所述的方法，其特征在于，以基因组DNA为模板进行PCR扩增。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述基因组DNA提取自于分泌抗体的细胞。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述细胞为杂交瘤或B细胞。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述细胞来自于脊椎动物，优选的，所述细胞来自哺乳动物。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物选自人、鼠、兔、猴、马、牛、羊、羊驼、骆驼和猪。
14.根据权利要求5-8任一项所述的方法，其特征在于，在进行PCR扩增后，所述方法包括：对得到的扩增产物进行测序，获得目标抗体的重链可变区序列或轻链可变区序列。
15.一种用于鉴定抗体序列的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-5任一项所述的扩增引物。
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