[发明专利]一种长效EPO活性检测方法

说明书

本发明公开了一种长效EPO活性检测方法。设置生理盐水组为空白组，短效EPO组为对照组，待测药物组，分别将生理盐水、短效EPO和待测药物对小鼠进行皮下注射，定期采集血液；然后用流式细胞仪检测血液中网织红细胞含量，并计算网织红细胞的百分率；和/或用细胞计数仪检测血液中血细胞的数量，计算血细胞中含有的网织红细胞的数量；通过网织红细胞含量和/或网织红细胞的数量来判定待测药物是否为长效EPO。本发明克服了上述缺陷，将待测药物注入小鼠体内，对血液中的网织红细胞含量和/或网织红细胞的数量进行判断，从而来判断待测药物是否为长效EPO的，其操作简单，准确。

技术领域

本发明属于药物活性检测领域，具体涉及一种长效EPO活性检测方法。

背景技术：

促红细胞生成素(Erythropoietin，EPO)是特异作用于红系祖细胞增殖、分化并成熟为红细胞的糖蛋白类造血生长因子，分子量30.4kD，由165个氨基酸组成，其中约占分子量40％的糖链在EPO生物合成、结构稳定、体内活性发挥很重要的作用。在全球范围内，有短效EPO和长效EPO之分。短效EPO的血清半衰期较短，临床给药次数为每周2-3次，给药频繁。长效EPO的血清半衰期可以达到两周，临床给药次数为一周到两周1次(取决于疾病和进程的不同)。我国已经获批的EPO产品均为短效，尚没有长效EPO的上市，而长效EPO在国外已经上市超过10年。我国长效EPO尚处于临床试验和临床前研究阶段。

EPO生物学活性与其在体内的半衰期密切相关。EPO生物学活性测定方法分体外法和体内法。因为现今我国医药市场主要以短效EPO为主，现阶段体内生物学活性检测方法也主要针对短效EPO，而针对长效EPO的体内活性的检测方法暂鲜见，因此无法判断研发的EPO是否具有长效性。

因此开发本方法用于检测判断EPO长短效性。

发明内容：

本发明的目的是提供一种长效EPO活性检测方法，该方法解决了现有技术中的空缺和存在的问题，且操作简单、准确。

本发明的长效促红细胞生成素(EPO)活性检测方法，包括以下步骤：

a、设置生理盐水组为空白组，短效EPO组为对照组，待测药物组，分别将生理盐水、短效EPO和待测药物对小鼠进行皮下注射，定期采集血液；

b、然后用流式细胞仪检测血液中网织红细胞含量，并计算网织红细胞的百分率；和/或用细胞计数仪检测血液中血细胞的数量，计算血细胞中含有的网织红细胞的数量；

通过网织红细胞含量和/或网织红细胞的数量来判定待测药物是否为长效EPO。

优选，所述的定期采集血液是定期进行尾静脉取血。

进一步优选，所述的定期进行尾静脉取血是每天进行尾静脉取血。

EPO注射到小鼠体内后，短效EPO组在第5天网织红细胞含量(Ret％)恢复至正常小鼠水平；而长效EPO组，小鼠Ret％在注射后第7天仍比对照组高，则可判定待测药物为长效EPO。

计算公式：

Ret％＝(网织红细胞数量/红细胞数量)*100％。

从第7天开始，由于前面几天EPO促进网织红细胞增多，最终成熟为红细胞(需要时间约为24-48小时)的绝对数量也增多。通过细胞计数仪对空白组、短效EPO和待测药物组的血细胞计数，计算小鼠血液中网织红细胞的绝对数量。网织红细胞的绝对数量的多少也可判定待测药物是否为长效EPO。

计算公式：

Ret数量＝红细胞数量*Ret％