[发明专利]一种哺乳动物卵母细胞去核的方法

权利要求书

1.一种哺乳动物卵母细胞去核的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获取卵丘卵母细胞复合体；

(2)去除(1)中卵丘卵母细胞复合体中卵母细胞透明带外围的卵丘颗粒细胞，剩下卵母细胞；

(3)将(2)所得的卵母细胞孵育显核；孵育显核处理为：将卵母细胞置于0.5μg/mL的脱羰秋水仙碱(DEME)培养液中孵育显核1h，或者置于浓度为5％的蔗糖溶液中处理10min；

(4)将(3)中显核后的卵母细胞置于培养液中处理；培养液含有7.5μg/mL的Hochest33342处理时间为2min；

(5)调试荧光灯；把荧光灯的照射范围调试到最小，把倒置显微镜光源调暗至肉眼可见卵母细胞，然后把荧光灯照射强度调试到白光可见荧光圈；

(6)将(4)中培养液处理后的卵母细胞清洗后转入去核液滴内；将处理后的卵母细胞用操作液洗5遍后转入覆盖石蜡油的30-40μL含有5-6.5μg/mLCB去核液滴内；

(7)荧光下去核；去核操作具体为：在配有脚踩控制荧光灯遮挡板的倒置显微镜下；固定住卵母细胞；用去核针拨动卵母细胞使极体位于时钟4点的位置，去核针3钟点位置插入透明带内，吸去极体及卵母细胞表面小部分胞质；控制荧光照射在去核针前端，当去核针中看到发蓝色荧光的核质时立即停止吸核动作；关闭荧光镜头，拔出去核针，去核完成；

所述脚踩控制荧光灯遮挡板的倒置显微镜，包括显微镜本体、遮光控制系统和光源发射器；所述遮光控制系统包括遮光装置和脚踏开关；所述遮光装置位于显微镜主体和光源发射器之间；所述遮光装置通过螺纹分别与显微镜主体和光源发射器连接；所述脚踏开关与遮光装电点连接；

所述遮光装置包括遮光挡片导向盖、遮光挡片导向齿轮、至少一个遮光挡片、驱动输出齿轮和电动机；所述遮光挡片的顶面设有一上导向凸体，所述遮光挡片的底面设有一下导向凸体；所述遮光挡片导向盖的底面开设有与上导向凸体数量相等且一一对应地被上导向凸体嵌入的第一导向槽，所述遮光挡片导向盖开设有中心透光口；所述遮光挡片导向齿轮设有第一透光通孔；所述遮光挡片导向齿轮的顶面开设有与下导向凸体数量相等且一一对应地被下导向凸体嵌入的第二导向槽；所述遮光挡片导向齿轮与驱动输出齿轮进行齿轮啮合；所述驱动输出齿轮安装于电动机的电机轴上。

2.根据权利要求1所述的哺乳动物卵母细胞去核的方法，其特征在于，所述步骤(1)中获取的卵丘卵母细胞复合体，体外成熟培养42-44h。

3.根据权利要求1所述的哺乳动物卵母细胞去核的方法，其特征在于，所述步骤(3)中孵育显核处理选用含第一极体的MⅡ期卵母细胞。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的哺乳动物卵母细胞去核的方法，其特征在于，所述去核方法适用于哺乳动物猪、牛或羊的卵母细胞。