[发明专利]一种生物源二肽基肽酶-IV抑制剂的制备方法

说明书

本发明涉及蛋白质提取技术领域，为解决日本黄姑鱼加工过程中产生大量的副产物，资源利用率低的问题，提供一种生物源二肽基肽酶‑IV抑制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将日本黄姑鱼鱼皮预处理得鱼皮粉，然后将鱼皮粉提取胶原蛋白，离心干燥，得日本黄姑鱼鱼皮胶原蛋白；(2)利用复合酶对步骤(1)得到的日本黄姑鱼鱼皮胶原蛋白进行酶解，得日本黄姑鱼鱼皮胶原肽；(3)将日本黄姑鱼鱼皮胶原肽通过二肽基肽酶筛选试剂盒筛选，即得生物源二肽基肽酶‑IV抑制剂。本发明以日本黄姑鱼鱼皮为主要原料，通过较为高效的工艺制得二肽基肽酶‑IV抑制肽，该抑制肽具有很好的抑制二肽基肽酶‑4的作用，具有很好的抗高血糖的功效。

技术领域

本发明涉及蛋白质提取技术领域，尤其涉及一种生物源二肽基肽酶-IV抑制剂的制备方法。

背景技术

糖尿病已成为继恶性肿瘤、心血管之后，第三大严重威胁人类健康和生命的代谢性疾病，它能引发脑血管疾病、冠心病、视网膜病变等多种并发症，甚至死亡。目前，糖尿病的控制与治疗主要是依靠食物控制和药物。治疗糖尿病的药物主要是人工合成的药物，它们都有一定的毒副作用。

肠促胰岛素药物中的二肽基肽酶-4(Dipeptidylpeptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)是一种丝氨酸蛋白酶，能迅速裂解和失活肠促胰岛素、神经肽和细胞因子。DPP-4可特异性切断GLP-1(胰高血糖素样肽-1)肽链N端2位上的丙氨酸或脯氨酸残基，从而使GLP-1失活。GLP-1作为一种重要的肠促胰岛素，除能促进胰岛素分泌及抑制胰高血糖素分泌外，还具有增加饱腻感、减缓胃排空时间、抑制胰岛β细胞凋亡和促进β细胞增殖等作用。由于可被DPP-4迅速降解，GLP-1的体内半衰期极短，若能抑制DPP-4活性则可有效延长GLP-1的作用时间，从而有利于降低血糖水平，具有治疗糖尿病的作用。

DPP-IV抑制肽无论是从有效性还是安全性，对糖尿病都具有较好的疗效。来源于食品蛋白DPP-IV抑制肽具有来源广泛、安全性高、降血糖效果好等优点，已成为关注和研究的热点。

日本黄姑鱼是我国重要的新养殖品种之一，在加工过程中产生大量的副产物，资源利用率低。中国专利文献上公开了“一种日本黄姑鱼鱼皮明胶的制备方法”，其公告号为CN10841037A，该发明提供了一种工艺简单，能够充分利用日本黄姑鱼的下脚料的方法，但是该发明工艺复杂，不利于实现产业化。

发明内容

本发明为了克服日本黄姑鱼加工过程中产生大量的副产物，资源利用率低的问题，提供了一种生物源二肽基肽酶-IV抑制剂的制备方法，通过本发明制备的活性肽生理活性显著，可用于药品、功能食品、食品等领域，因此具有良好的应用前景。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种生物源二肽基肽酶-IV抑制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将日本黄姑鱼鱼皮预处理得鱼皮粉，然后将鱼皮粉置入2～5wt％的乙酸溶液中，按照每g鱼皮粉中加入0.01～0.03mg胃蛋白酶的添加量加入胃蛋白酶，于温度3～5℃条件下提取胶原蛋白，离心干燥，得日本黄姑鱼鱼皮胶原蛋白；

(2)利用复合酶对步骤(1)得到的日本黄姑鱼鱼皮胶原蛋白进行酶解，得日本黄姑鱼鱼皮胶原肽；

(3)将日本黄姑鱼鱼皮胶原肽通过二肽基肽酶筛选试剂盒筛选，即得生物源二肽基肽酶-IV抑制剂。

步骤(3)中所述通过二肽基肽酶筛选试剂盒筛选的步骤按照二肽基肽酶ⅣELISA试剂盒(供应商为上海江莱生物科技有限公司)的说明书进行。

作为优选，步骤(1)中，所述预处理工艺为：

(a)将鱼皮清洗后，冷冻干燥，粉碎至粒径为25～50μm，得鱼皮冷冻粉；