[发明专利]多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂

说明书

本发明涉及多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂。本发明提供了对团头鲂选育系F₉群体及其连续三代人工雌核发育团头鲂群体(G₁，G₂，G₃)进行的基因组分析的方法和工具，以及提供了区分不同团头鲂育种群体的稳定的分子遗传标记。

技术领域

本发明属于鱼类养殖领域，更具体地，本发明涉及多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂。

背景技术

人工雌核发育是一种有效的产生纯系的手段，而且在鱼类染色体操作、遗传分析以及性别控制等方面具有潜在的应用价值。迄今为止，各国学者已先后在鲤科、鲑科、鲽科、鳅科和鲷科等近百种重要经济鱼类开展雌核发育研究并获得成功，在一些重要水生模式动物如青鳉和斑马鱼等也有成功先例。

团头鲂“浦江1号”是养殖性能优良的草食性鱼类首例选育良种，为使该良种的优良性状基因进一步纯化、巩固和发展，自1999年以来，上海海洋大学水产种质资源研究室先后对团头鲂“浦江1号”选育系F₅和F₆进行了人工雌核发育(抑制第二次成熟分裂)的研究，成功地生产了一定数量的雌核发育鱼(G₁)；随后，他们又通过抑制一次雌核发育鱼(G₁)卵子的第二次成熟分裂成功地诱导出两次雌核发育鱼(G₂)，在G₂的基础上，用同样的方法诱导得到连续3次减数分裂雌核发育鱼(G₃)。近几年的养殖实践证明，这些雌核发育团头鲂(G₁、G₂、G₃)及其后代具有很好的生长优势，其生长速度超过了团头鲂选育系。但是，在实际的育种过程中，不同雌核发育世代团头鲂群体的遗传纯合度的具体指标如何，是否能达到遗传育种和遗传分析所需要的纯合度。此外，在雌核发育过程中可能由于经过辐射处理的异源精子的某些未失活遗传物质的影响、物理隔离的不完善等因素而影响雌核发育鱼群体的遗传纯合性。因此，在将培育的雌核发育群体应用于育种实践前，需要用各种技术在分子水平上对其基因组进行精确的遗传学分析，以确定雌核发育类型鱼类群体的遗传纯合度是否能达到遗传育种的要求。另外，由于雌核发育团头鲂在形态上和普通团头鲂完全一致，从外形上无法鉴别普通团头鲂与雌核发育团头鲂(G₁、G₂、G₃)，这导致这几种鱼(团头鲂“浦江1号”、G₁、G₂、 G₃)在养殖生产和选育过程中极易混杂，为下一步的纯系选育工作埋下了隐患。

鉴于此，找到合适的评估不同雌核发育团头鲂群体的遗传多样性和遗传纯合度的工具，开发出能够有效区分不同团头鲂群体(团头鲂“浦江1号”、 G₁、G₂、G₃)的特异性分子标记已成为迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供了多代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性鉴定方法及试剂。

在本发明的第一方面，提供一种特异性鉴定团头鲂(Megalobrama amblycephala)连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的方法，所述方法包括：以特异性的引物作为分子标记，对待测鱼样品进行PCR扩增，根据扩增产物的 DNA片段大小确定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼；其中，所述的特异性引物选自：SEQ ID NO:3(S3)、SEQ ID NO:19(S40)、SEQ IDNO: 24(S58)、SEQ ID NO:32(71)、SEQ ID NO:36(S75)。

在本发明的另一方面，提供分子标记的应用，用于特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼，或用于制备特异性鉴定团头鲂连续2～3次减数分裂雌核发育鱼的试剂盒；其中，所述的分子标记包括选自下组的引物或其组合：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:32、 SEQ ID NO:36。