[发明专利]一种用于检测白喉抗体的抗原蛋白、试剂盒及制备方法

说明书

本发明涉及一种制备用于检测白喉抗体的抗原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将携带CRM197蛋白表达框的杆状病毒表达载体感染昆虫细胞中，得到感染的昆虫细胞；S2：将感染后的昆虫细胞培养进行培养增殖；S3：将增殖后的昆虫细胞进行破碎，提取其中的抗原蛋白；还涉及该方法制备的抗原蛋白，还涉及包括该抗原蛋白的试剂盒。表达的CRM197蛋白安全无毒性、产量高、易于分离纯化，同时与白喉抗体有很高的亲和力、特异性好。

技术领域

本发明白喉防治领域，更特别地，涉及一种制备用于检测白喉抗体的抗原蛋白的方法，该方法制备的抗原蛋白，以及包括该抗原蛋白的试剂盒。

背景技术

白喉(Diphtheria)是一种急性上呼吸道传染病，由革兰氏阳性白喉棒状杆菌经空气飞沫传播引起。白喉外毒素是主要致病因素。其临床特征为咽、喉、鼻等处粘膜充血、肿胀并有灰白色假膜形成，以及由细菌外毒素引起的全身中毒症状，严重者可有中毒性心肌炎和周围神经麻痹。引入白喉疫苗前，白喉是引起儿童死亡的一个主要原因。现在许多发展中国家白喉仍然流行。白喉对人类带来极大危害，尤其对儿童健康造成巨大威胁，在百白破疫苗问世之前病死率居高不下，可达到10％。WHO六大区域2010～2014年，平均有158个国家或地区有白喉报告。

白喉病后有较强的免疫力，主要是机体能产生中和白喉杆菌的抗体(IgG)。1～5岁易感性最高，5岁以上易感性逐渐下降，成人绝大多数由于隐性感染或预防接种，已获得免疫力。临床上对白喉的感染、实验室诊断及其流行特征极为重视。随着科学技术的发展和人民生活水平的提高，人们对优生优育的认识逐步提高，检测白喉感染越来越受到重视。

免疫规划工作一直以来都是政府工作的重点之一，儿童的预防免疫关乎其一生的健康，疫苗接种、疾病预防远比疫病的治疗更为重要。由于个体免疫水平的差异、疫苗质量、接种程序的规范与否以及随时间推移抗体水平的逐渐下降等原因，疫苗接种后，大部分人群获得了免疫保护，但仍有部分人群由于以上原因导致抗体水平低下，无法抵御相关传染病的侵袭。开展抗体检测，对抗体水平不足的人群进行有针对性的补种，对有效形成免疫屏障、预防传染病的发生、保护相关人群的健康有着十分重要的意义。

目前检测白喉抗体的方法主要有5种，包括锡克氏试验、动物体内中和试验、体外微孔培养物中和试验、间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)。其中前两项为体内试验,后三项为体外实验。用ELISA方法检测白喉抗体有特异性强、重复性好、操作简便、灵敏度高、耗时短并可同时测定大量样品等特点，在有标准品并能够绘制标准曲线时还可用于定量检测白喉抗体。从实用、经济以及人道角度考虑，可定量的ELISA技术越来越受到青睐。定量检测由于能获得准确的抗体水平，通过抗体定量就能准确了解机体的免疫水平，而且可连续检测血清中抗体水平，以便对不同时间和地点的检测结果进行比较。疫苗接种效果监测是检测保护性抗体IgG，定性分析无法确定这种保护性抗体的强弱，同时定量检测还可以对保护性抗体水平衰减情况进行监测。