[发明专利]一种用于检测白喉抗体的抗原蛋白、试剂盒及制备方法在审
| 申请号： | 201811166323.2 | 申请日： | 2018-10-08 |
| 公开（公告）号： | CN109100517A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 华俊清;曾强;黄晶;王诺;罗玉东;吴边 | 申请（专利权）人： | 武汉生命科技股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 刘江炀 |
| 地址： | 430075 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗原蛋白 白喉抗体 制备 昆虫细胞 试剂盒 杆状病毒表达载体 感染昆虫细胞 昆虫细胞培养 分离纯化 培养增殖 表达框 无毒性 感染 检测 亲和力 增殖 破碎 携带 安全 | ||
1.一种制备用于检测白喉抗体的抗原蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将携带CRM197蛋白表达框的杆状病毒表达载体感染昆虫细胞中，得到感染的昆虫细胞；
S2：将感染后的昆虫细胞培养进行培养增殖；
S3：将增殖后的昆虫细胞进行破碎，提取其中的抗原蛋白，即得。
其中，所述CRM197蛋白的DNA编码序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中，所述昆虫细胞为Sf9细胞。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S1包括以下步骤：
S11：将Sf9细胞经克氏瓶静置培养复苏；
S12：对复苏后的Sf9细胞进行传代培养，传代后初始密度不低于2.5×105个/mL的接种量逐步放大；
S13：当细胞生长密度达到2.0×106个/mL以上时，用所述携带CRM197蛋白表达框的杆状病毒表达载体感染所述Sf9细胞。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S2中，所述感染后的Sf9细胞培养96-108h，至80％以上的细胞出现明显病变。
5.权利要求1-4中任一项所述的方法制备的抗原蛋白。
6.权利要求5所述的抗原蛋白在制备检测白喉抗体的试剂中的应用。
7.一种用于检测白喉抗体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求5所述的抗原蛋白。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：
含有所述抗原蛋白的溶液；ELISA板；系列校准品；样品稀释液；浓缩洗涤液；显色试剂。
9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：
用所述抗原蛋白包被的抗原包被板；系列校准品；样品稀释液；浓缩洗涤液；显色试剂。
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