[发明专利]基于S基因型的为柑橘柚鉴定授粉供体的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种基于S基因型的为目标柑橘柚植株鉴定授粉供体的试剂盒，其特征在于，包括S基因检测试剂组，所述S基因检测试剂组包括引物对1-9中的两个或多个组合，所述引物对1由SEQ ID NO:1和2所示序列的引物组成，所述引物对2由SEQ ID NO:3和4所示序列的引物组成，所述引物对3由SEQ ID NO:5和6所示序列的引物组成，所述引物对4由SEQ ID NO:7和8所示序列的引物组成，所述引物对5由SEQ ID NO:9和10所示序列的引物组成，所述引物对6由SEQ ID NO:11和12所示序列的引物组成，所述引物对7由SEQ ID NO:13和14所示序列的引物组成，所述引物对8由SEQ ID NO:15和16所示序列的引物组成，所述引物对9由SEQ IDNO:17和18所示序列的引物组成。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括花粉管苯胺蓝检测试剂组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述花粉管苯胺蓝检测试剂组包括固定液、95%的酒精、4 M NaOH溶液和0.1 M K₃PO₃配制的0.1%苯胺蓝溶液。

4.一种基于S基因型的为目标柑橘柚植株鉴定授粉供体的方法，其特征在于，使用权利要求1-3中任一项所述的试剂盒检测目标柑橘柚植株和候选授粉供体的S基因，当所述目标柑橘柚植株和候选授粉供体的S基因不同时，判定所述候选授粉供体可作为所述目标柑橘柚植株的授粉供体，当所述目标柑橘柚植株和候选授粉供体的S基因相同时，判定所述候选授粉供体不能作为所述目标柑橘柚植株的授粉供体。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述S基因检测试剂组包括引物对1-9中的两个或更多个组合，所述方法包括以下步骤：

步骤1：分别提取所述目标柑橘柚植株和候选授粉供体的基因组；

步骤2：分别以步骤1中提取的所述目标柑橘柚植株和候选授粉供体的基因组为模板，使用所述引物对进行PCR扩增，检测扩增产物；

步骤3：当所述候选授粉供体基因组的扩增产物与所述目标柑橘柚植株基因组的扩增产物不同时，判定所述候选授粉供体可作为所述目标柑橘柚植株的授粉供体；当所述候选授粉供体基因组的扩增产物与所述目标柑橘柚植株基因组的扩增产物相同时，判定所述候选授粉供体不能作为所述目标柑橘柚植株的授粉供体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，还包括步骤4：对授粉后的柑橘柚类植株上的花粉管进行苯胺蓝染色，以确定花粉管已及时到达花柱底部。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤4包括以下步骤：

步骤41：步骤3中鉴定的所述授粉供体给所述目标柑橘柚植株授粉5天后，取柱头组织在固定液中固定12-24小时；

步骤42：将固定后的柱头组织浸泡于55℃的4 M NaOH中，直至组织变软；

步骤43：将软化的柱头组织浸渍于苯胺蓝染色液染色，至着色可用于观察。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤43中，所述苯胺蓝染色液染为0.1 MK₃PO₃配制的0.1%苯胺蓝溶液。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤43中，染色时间为20 min。