[发明专利]一种皮肤间充质干细胞的原代分离方法有效
| 申请号： | 201811156966.9 | 申请日： | 2018-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN109234230B | 公开（公告）日： | 2021-05-25 |
| 发明（设计）人： | 王一飞;陈海佳;葛啸虎;张梦晨;王小燕 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘伟;赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市开发区广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 皮肤 间充质 干细胞 分离 方法 | ||
1.一种皮肤间充质干细胞的原代分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
A、取皮肤组织预处理后加0.5U/ml-2.5U/mlDispase II分散酶37℃消化1h，清洗后反复吹打组织块使其细胞分离，过滤后离心，得到细胞沉淀用Lonza完全培养基重悬后接种于培养皿中培养，37℃、5％CO2进行差速贴壁60-90min；
B、取未贴壁的细胞悬液接种至纤黏连蛋白包被的培养板中培养，待细胞汇合达到80％～90％后进行传代。
2.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，步骤A所述预处理为皮肤组织运输时保存于4℃、含双抗的葡萄糖溶液中，皮肤组织剪成3-5mm长方形，用氯化钠注射液清洗后置于75％乙醇中清洗，再用氯化钠注射液清洗后剪成细小组织块。
3.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，步骤A所述清洗为氯化钠注射液清洗。
4.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，步骤A所述过滤为100μm一次性细胞筛网过滤。
5.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，步骤A所述离心为400g离心10min。
6.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，步骤B所述未贴壁的细胞悬液的接种密度为5×104/ml。
7.根据权利要求1所述的原代分离方法，其特征在于，步骤B所述包被培养板的纤黏连蛋白的浓度为10-50μg/ml；所述包被方法为37℃孵育30-60min；所述培养为37℃、5％CO2浓度下培养；所述培养首次换液应间隔72h，之后每1-3天换一次液。
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