[发明专利]一种植物环状RNA表达框架及其应用

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体公开了一种植物环状RNA表达框架及其应用。所述植物环状RNA表达框架包括上游框架序列、待表达目的基因序列、下游框架序列；所述上游框架序列的核苷酸序列或其互补序列如SEQ ID NO.1所示；所述下游框架序列的核苷酸序列或其互补序列如SEQ ID NO.2所示；所述待表达目的基因序列可根据实际应用需要而定。本发明通过利用植物环状RNA表达框架中的上游框架序列和下游框架序列，使含有特定目的基因的RNA能够表达并环化，解决了现有技术无法实现植物中特定目的基因环状RNA表达的不足。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体地说，涉及一种植物环状RNA表达框架及其应用。

背景技术

环状RNA是一类不具有5’末端帽子和3’末端polyA尾巴，通过共价键头尾相连的单链环状RNA分子。随着测序技术与分子生物学技术的进步，科学家们对环状RNA进行了深入研究，发现环状RNA在不同物种中具有一定的保守性，且在不同组织和发育阶段大量稳定存在。环状RNA在高度进化过程中仍被保留下来，表明它在生物体内具有一定的功能。目前对生物体内环状RNA的研究表明，其在转录和转录后调控以及蛋白质翻译等过程中具有重要功能。环状RNA主要作为“海绵”吸附miRNA，少数环状RNA作为翻译的模板主导蛋白质的合成。此外，circRNA可以通过碱基互补配对机制直接调控其他RNA水平，也可以与相关蛋白质结合，抑制或调控蛋白质活性。

目前，在动物体中表达环状RNA的表达载体较为多见，但未见能够在植物中表达环状RNA的研究报道。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种植物环状RNA表达框架及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明首先提供一种植物环状RNA表达框架，其特征在于，包括上游框架序列、待表达目的基因序列、下游框架序列；

所述上游框架序列的核苷酸序列或其互补序列如SEQ ID NO.1所示；所述下游框架序列的核苷酸序列或其互补序列如SEQ ID NO.2所示；所述待表达目的基因序列可根据实际应用需要而定。

本发明所提供的植物环状RNA表达框架可插入植物表达载体中，从而表达目的基因的环状RNA。

进一步地，本发明提供一种含有所述植物环状RNA表达框架的植物环状RNA表达载体。

所述植物环状RNA表达载体的制备方法为：将所述植物环状RNA表达框架通过同源重组的方法构建到植物表达载体中。

优选在进行同源重组前，在所述植物环状RNA表达框架的两端添加植物表达载体同源臂。

本发明所采用的植物表达载体包括但不限于pCAMBIA1302、pCAMBIA3301，pCAMBIA2300等。在本发明的具体实施方式中，以pCAMBIA1302载体为例进行示例性说明。

更进一步地，本发明提供一种更为具体的所述植物环状RNA表达载体的构建方法，包括：

(1)以玉米基因组为模板，利用以下两组引物进行分段PCR扩增，分别得到所述上游框架序列和所述下游框架序列；

第一组引物：

F：5’-GTGCTCGCCTTACCGCCT-3’；

R：5’-CTGCAAGAAGTAATCTAAAATCA-3’；

第二组引物：

F：5’-GTATGTTACCAAATTTAT-3’；

R：5’-CTGCCAGAAATATACA-3’。