[发明专利]抗Claudin18A2嵌合抗原受体、其修饰的T细胞及T细胞制备方法和用途

说明书

本发明公开了抗Claudin18A2嵌合抗原受体、其修饰的T细胞及T细胞制备方法和用途，其中抗Claudin18A2嵌合抗原受体，包括依序连接的CD8αLeader、Claudin18A2抗原结合区、CD8的Hinge区和跨膜区、4‑1BB和CD28的共刺激区、CD3ζ的信号传导区。本发明创造性的选择Claudin18A2靶点，同时结合敲除T细胞中的PD‑1蛋白，使得改造后的T细胞提高对消化系统肿瘤，尤其是对胃癌的治疗效果。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种抗Claudin18A2嵌合抗原受体、其修饰的T细胞及T细胞制备方法和用途。

背景技术

PD-1(程序性死亡受体1，programmed death 1)是55KD的跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员。其胞外区只有1个IgV样区，胞浆区有2个酪氨酸残基，尾部有1个ITIM(immunoreceptor tryosine-based inhibitory motif)。PD-1可表达于活化的T细胞、B细胞和骨髓细胞，以及CD4-CD8-胸腺细胞。PD-1有两个配体，PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)，均为B7家族中的新成员。PD-1是免疫抑制性受体，与其配体PD-L1、PD-L2相互作用传递抑制性信号，在免疫应答中发挥负向调控作用。T细胞上的PD-1与肿瘤细胞中的PD-L1/PD-L2的结合，可抑制活化的T细胞攻击肿瘤细胞，导致免疫系统不能发挥全部作用，使肿瘤细胞逃逸。

由于PD-1蛋白在免疫应答中发挥负向调控作用，使得部分肿瘤细胞逃避T细胞的攻击，造成肿瘤细胞的扩散。敲除T细胞中的PD-1蛋白，可扩大T细胞的攻击范围，增强T细胞的免疫能力。本研究中利用Crispr/Cas9系统，敲除T细胞中的PD-1基因，使其不表达PD-1蛋白，打开免疫系统的刹车闸，增强免疫系统的功能。

申请人进行了深入的研究，并于2017年5月9日提交了申请号为201710322510.4的中国发明专利，公开了一种敲除PD-1的T细胞制备方法，该技术是利用Crispr/Cas9系统来敲除PD-1基因。本发明还涉及Crispr/Cas9技术修饰的T细胞，所述T细胞表面含有PD-1蛋白，可与癌细胞表面的PD-L1蛋白结合，阻碍活化T细胞攻击癌细胞。敲除T细胞中的PD-1基因，打开了免疫系统的刹车闸，增强免疫系统的功能。

目前，在全球范围内，胃癌占据肿瘤中的第五位，其致死率占据第三位。在东亚和东欧最常见，男性发病率约为女性的2倍。胃癌的发病原因有很多，最常见原因是幽门螺杆菌的感染，占病例总数的60％以上。吸烟、腌制蔬菜和肥胖等饮食因素也是引发胃癌的危险因素。大约10％的病例发生在家庭中，1％到3％的病例是由遗传病引起的遗传综合症，如遗传性弥漫性胃癌。申请人在长期的研究中发现，单纯敲除T细胞中的PD-1基因而制备得到的基因药物，对消化系统肿瘤，尤其是胃癌效果有待于进一步的提升，但是，处于瓶颈阶段的技术提升难度极大，也是本领域的技术难题。

因此，在以上技术的基础上研究一种抗Claudin18A2嵌合抗原受体、其修饰的T细胞及T细胞制备方法和用途，不但具有迫切的研究价值，也具有良好的经济效益和工业应用潜力，这正是本发明得以完成的动力所在和基础。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供抗Claudin18A2嵌合抗原受体、其修饰的T细胞及T细胞制备方法和用途，以提高对消化系统肿瘤，尤其是对胃癌的治疗效果。

第一方面，本发明提供的抗Claudin18A2嵌合抗原受体，包括依序连接的CD8αLeader、Claudin18A2抗原结合区、CD8的Hinge区和跨膜区、4-1BB和CD28的共刺激区、CD3ζ的信号传导区。