[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒、疫苗及其制备方法和用途

说明书

本发明提出了分离的核酸、分离的多肽、微生物、筛选微生物的方法、猪繁殖与呼吸综合征疫苗及其制备方法、制备抗体的方法、抗体、人工抗体、制剂在制备药物或者试剂盒中的用途和试剂在制备试剂盒中的用途。与SEQ ID NO：1相比，该分离的核酸具有选自下列的至少一种突变：c.32GA、c.59TG、c.89AG、c.95GA、c.194AG和c.370TG。发明人通过将JK100病毒在Marc‑145细胞和动物肺脏中交替传代，获得一种新型猪繁殖与呼吸综合征病毒，该病毒在机体内可以实现短时间诱导高水平的中和抗体和特异性的细胞免疫反应，起到较好地免疫应答效果。

技术领域

本发明涉及生物医药领域。具体地，本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒、疫苗及其制备方法和用途。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)俗称猪蓝耳病，在世界范围内广泛存在。PRRS于1987年在美国首次发生，分别在1991年欧洲和1992年美国分离到病原。1992年5月世界动物卫生组织将该病列为B类传染病。我国是在1996年由郭宝清首次分离到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，目前被我国列为“二类传染病”。

PRRS在临床上表现为妊娠母猪发生流产、早产、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍，仔猪和育肥猪出现呼吸道症状，并伴随生长缓慢病死率高等。但是该病可以表现为隐性感染和持续感染，同时导致猪免疫机能降低，还能跟其它多种病原微生物共同作用，造成其他相关疾病，给该病的防治造成极大困难。

PRRSV有两大显著的免疫学特征，同时也是PRRS防控中遇到的最大难题。一是抗体依赖的感染增强作用(ADE)，即低水平抗体的存在，不是提供保护，而是介导和加强感染。猪在感染PRRSV后会迅速产生抗体应答，但感染早期产生的抗体主要是非中和抗体，而低水平的中和抗体直到感染后4周左右才能检测到，这就导致了ADE作用。二是持续性感染，即猪机体内病毒的持续存在和病原污染场内感染猪群的持续性存在。PRRSV引起的持续感染，可能是通过阻碍机体内干扰素的诱导和/或通过专嗜性细胞中抗病毒蛋白活性来逃避机体的免疫。细胞免疫监视系统不易将病毒从感染猪体中清除，从而导致长期的病毒血症和持续感染的原因。

研究表明：PRRS病毒GP5蛋白是最主要的保护性抗原蛋白，能够诱导产生较高水平的中和抗体。GP5蛋白的外功能区包含一个非中和表位(A表位)和一个中和表位(B表位)，诱骗表位(decoy epitop)A表位的存在导致机体降低对中和表位B表位的免疫应答，此外B表位上及其周围的糖基化位点也降低了其免疫原性。PRRSV感染后抑制IFN-a的产生以降低风险信号的水平，诱导机体产生非中和活性的多个克隆抗体，并通过GP5蛋白上N端糖基化位点掩盖中和表位，延迟中和抗体的产生，这是病毒建立免疫逃避以及形成持续性感染的主要机制。

然而，目前能够在短时间内诱导高水平的中和抗体和特异性的细胞免疫反应的病毒仍有待开发。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

专利申请号为CN00121274.5的中国专利申请中公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒JK100。但是，其病毒效价低，以此制备成的疫苗保护效果不好，反而有引起ADE的危险。现有市售的经典株蓝耳弱毒活疫苗为VR2332株、Ch-1R株、R98株，这些疫苗也存在免疫初期中和抗体和细胞免疫产生时间晚(28天)、抗体水平达不到一定阈值的情况下、引发ADE作用等问题。

有鉴于此，发明人通过将JK100病毒在Marc-145细胞和动物肺脏中交替传代，不仅可以提高病毒的滴度，并且造成了病毒在GP5蛋白上诱骗表位和糖基化位点的改变，削弱了其对中和抗体产生的影响，诱导机体较早地产生较高效价的中和抗体，起到较好的免疫应答效果。