[发明专利]一种提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒及其提取方法和应用

说明书

本发明涉及外泌体分离技术领域，提供一种提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒，包括蛋白A磁珠、磁珠清洗液、FABP4抗体、1号清洗液和2号清洗液。其中FABP4抗体能够与待测血清中的脂肪组织来源外泌体结合，蛋白A磁珠能够与外泌体‑FABP4抗体相互作用，形成蛋白A磁珠‑FABP4抗体‑外泌体复合物，1号清洗液能够去除血清中非脂肪外泌体成分，2号清洗液则能够将“蛋白A磁珠‑FABP4抗体‑外泌体”复合物中的外泌体、FABP4抗体以及蛋白A磁珠之间的相互作用解离，实现从血清中特异性分离脂肪组织来源的外泌体。

技术领域

本发明涉及外泌体分离技术领域，具体涉及一种提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒及其提取方法和应用。

背景技术

外泌体(exosomes)是由细胞分泌到细胞外的囊泡结构，通常为30～120nm大小的膜包裹结构。外泌体可特异性地包裹一些蛋白、脂质或者核酸等物质，具有生物活性，能够被受体细胞吸收，实现细胞间的物质运输和信息传递。

脂肪组织主要由大量群聚的脂肪细胞构成，还有小部分的巨噬细胞等，是人体内重要的能量储存器官。脂肪组织还是人体中重要的内分泌器官，调控胰岛素的敏感性、血压水平、内皮功能以及炎症反应等重要的病理过程。由于脂肪具有重要的功能，脂肪过多和过少都不利于健康。正常脂肪具备抗炎等功能，而疾病状态下，反而成为促炎成分。

判读脂肪健康状态，从而对个体进行饮食和生活方式的科学指导，是目前预防医学和大众健康面临的重要问题。脂肪外泌体能够反映脂肪的健康状态，如何从外周血中快速提取这部分外泌体，并进行准确判读成为本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明为了解决现有技术无法从外周血中快速分离得到脂肪组织来源的外泌体的问题，提供了一种提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒，利用该试剂盒能够相对特异性等获取脂肪组织来源的外泌体。

本发明还提供了上述技术方案所述提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒在制备判断脂肪功能状态试剂盒中的应用，通过判断脂肪组织来源的外泌体处于抗炎作用还是促炎作用来判断个体的脂肪功能状态。

为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒，包括以下组分：蛋白A磁珠、磁珠清洗液、FABP4抗体、1号清洗液和2号清洗液；

所述磁珠清洗液为pH值为7.2～7.8的PBS缓冲液；

所述1号清洗液为含有牛血清白蛋白的PBS缓冲液，所述1号清洗液中牛血清白蛋白的质量体积分数为0.5～2％；

所述2号清洗液为pH2.8～3.5的甘氨酸溶液。

优选的，所述1号清洗液中的PBS缓冲液浓度为0.005～0.02mol/L；

所述甘氨酸溶液的浓度为0.1～0.2mol/L。

本发明提供了一种前述技术方案所述的试剂盒提取脂肪组织来源外泌体的方法，包括以下步骤：

(1)将蛋白A磁珠、叠氮化钠与水混合，得到磁珠混浊液，将所述磁珠混浊液进行第一离心，得到第一沉淀，将所述第一沉淀与磁珠清洗液混合后进行第二离心，得到的第二沉淀即为清洗后的蛋白A磁珠；

(2)将所述步骤(1)得到的清洗后的蛋白A磁珠与待测血清混合，4℃孵育后进行第三离心，得到血清上清液和第三沉淀；

(3)以所述步骤(2)得到的第三沉淀作为所述步骤(1)中的蛋白A磁珠，按照步骤(1)操作，得到清洗后的蛋白A磁珠；

(4)将所述步骤(2)得到的血清上清液与FABP4抗体混合，18～25℃孵育，得到血清混合液；