[发明专利]一种提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒及其提取方法和应用

权利要求书

1.一种利用提取脂肪组织来源外泌体的试剂盒提取脂肪组织来源外泌体的方法，包括以下步骤：

(1)将蛋白A磁珠、叠氮化钠与水混合，得到磁珠混浊液，将所述磁珠混浊液进行第一离心，得到第一沉淀，将所述第一沉淀与磁珠清洗液混合后进行第二离心，得到的第二沉淀即为清洗后的蛋白A磁珠；

(2)将所述步骤(1)得到的清洗后的蛋白A磁珠与待测血清混合，4℃孵育后进行第三离心，得到血清上清液和第三沉淀；

(3)以所述步骤(2)得到的第三沉淀作为所述步骤(1)中的蛋白A磁珠，按照步骤(1)操作，得到清洗后的蛋白A磁珠；

(4)将所述步骤(2)得到的血清上清液与FABP4抗体混合，18～25℃孵育，得到血清混合液；

(5)将所述步骤(4)得到的血清混合液、步骤(3)得到清洗后的蛋白A磁珠和1号清洗液混合，4℃孵育，以外置磁场进行固液分离，弃去上清，得到蛋白A磁珠-FABP4抗体-外泌体复合物；

(6)将所述步骤(5)得到的蛋白A磁珠-FABP4抗体-外泌体复合物与2号清洗液混合，振荡20～40min，以外置磁场进行固液分离，取上清，即得脂肪组织来源的外泌体；

所述的试剂盒，包括以下组分：蛋白A磁珠、磁珠清洗液、FABP4抗体、1号清洗液和2号清洗液；

所述磁珠清洗液为pH值为7.2～7.8的PBS缓冲液；

所述1号清洗液为含有牛血清白蛋白的PBS缓冲液，所述1号清洗液中牛血清白蛋白的质量体积分数为0.5～2％；

所述2号清洗液为pH2.8～3.5的甘氨酸溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述1号清洗液中的PBS缓冲液浓度为0.005～0.02mol/L；

所述甘氨酸溶液的浓度为0.1～0.2mol/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)磁珠混浊液中叠氮化钠的质量体积百分数为0.02～0.08％，所述磁珠混浊液中蛋白A磁珠的浓度为8～15mg/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的磁珠清洗液体积为磁珠混浊液体积的0.01～0.05％；所述磁珠清洗液为浓度为0.005～0.02mol/L的PBS缓冲液；

所述步骤(2)中的待测血清与步骤(1)磁珠混浊液的体积比为1000～2000:0.1～0.5。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)待测血清的体积与FABP4抗体的质量比为1～2mL:1～5μg。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)得到蛋白A磁珠-FABP4抗体-外泌体复合物后，还包括：将蛋白A磁珠-FABP4抗体-外泌体复合物与1号清洗液混合，4℃孵育，以外置磁场进行固液分离，弃去上清；重复上述步骤2～3次。