[发明专利]网织红细胞模拟物及其制备方法与应用

权利要求书

1.网织红细胞模拟物的制备方法，其特征在于，步骤如下：

步骤一、分离洗涤红细胞，得到纯化红细胞；

步骤二、用稀释液稀释纯化红细胞，加入加载剂，在脉冲电磁场的作用下将加载剂引入到纯化红细胞内；

所述稀释液由体积比为1:(30-50)的稀释液I和稀释液II组成；稀释液I由ATP、MgCl₂和水组成，ATP的浓度为10％-40％，MgCl₂的浓度为5％-28％；稀释液II由KH₂PO₄、NaHCO₃、葡萄糖和水组成，稀释液II的PH值为7.0-7.5，KH₂PO₄的浓度为0.5％-2.0％，NaHCO₃的浓度为0.05％-0.2％，葡萄糖的浓度0.01％-0.1％；

步骤三、向引入加载剂后的细胞中加入固定液，18-28℃固定，洗涤细胞，用细胞保存液保存，得到网织红细胞模拟物；

所述红细胞为人红细胞或者MCV与人红细胞类似的哺乳动物红细胞；

所述加载剂为人工合成100bp-2000bp的DNA片段或人工合成的RNA片段，加载剂的用量为1.0-1.5μg/L；

在脉冲电磁场的作用下将加载剂引入到纯化红细胞内的过程为：电穿孔仪器90-100V电压刺激4-8秒钟。

2.根据权利要求1所述的网织红细胞模拟物的制备方法，其特征在于，用稀释液稀释纯化红细胞至10^12-10¹⁴个/L。

3.根据权利要求1所述的网织红细胞模拟物的制备方法，其特征在于，所述细胞固定液为甲醛、戊二醛、丙酮、乙醇中的一种或多种，固定时间为3-5小时。

4.根据权利要求1所述的网织红细胞模拟物的制备方法，其特征在于，步骤一和步骤三中洗涤采用的洗涤液为PBS缓冲液、D-HANKS缓冲液、HEPES缓冲液、柠檬酸缓冲液、氯化钠缓冲液或硼酸缓冲液。

5.根据权利要求1所述的网织红细胞模拟物的制备方法，其特征在于，所述细胞保存液包括缓冲液、营养成分和防腐剂。

6.权利要求1-5任何一项所述的网织红细胞模拟物的制备方法制备的网织红细胞模拟物。

7.权利要求6所述的网织红细胞模拟物作为全自动血细胞分析仪检测网织红细胞的质量控制物的应用。