[发明专利]一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法

说明书

本发明公开了一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，涉及微生物技术领域。本发明包括步骤一：制备样品液；步骤二：稀释样品液；步骤三：分离培养；步骤四：制备纯化培养基；步骤五：纯化培养。本发明通过分离培养提高了菌种的纯化，解决了现有分离出的双歧杆菌活菌量较低的问题；通过对纯化培养基进行优化，有效的缩短了培养时间，解决了现有培养时间较长成本高，效率较低的问题。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，特别是涉及一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法。

背景技术

双歧杆菌属的细菌是人和动物肠道菌群的重要组成成员之一，广泛存在于人和动物的消化道和口腔等生境中；一些双歧杆菌的菌株可以作为益生菌而用在食品、医药和饲料方面；为了针对不同个体使用适宜的双歧杆菌，常用方法是通过粪便来分离出双歧杆菌的菌种在进行培养；但此类方法中开发的双歧杆菌活菌量较低，不易保存存活，同时现有的培养基培养时所需的培养时间较长，成本较高，效率较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，通过分离培养提高了菌种的纯化，解决了现有分离出的双歧杆菌活菌量较低的问题；通过对纯化培养基进行优化，有效的缩短了培养时间，解决了现有培养时间较长成本高，效率较低的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，包括以下步骤：

步骤一：制备样品液；取新鲜兔粪置于蛋白胨缓冲液中，充分搅拌均匀，一次离心处理后收集上层浊液；向上浊液加入适量蛋白胨缓冲液，再次离心处理后收集上层浊液，即为样品液；

步骤二：稀释样品液；取一定量样品液以十倍稀释法使用蛋白胨缓冲液进行稀释，稀释梯度为10^-1至10^-9；

步骤三：分离培养；分别取一定量的稀释梯度为10^-4至10^-9的稀释样品液置于培养基平板上，每个稀释梯度的稀释样品液做2至3个平行样；厌氧条件下培养45-50小时后在移至好氧条件下培养5-7小时；

步骤四：制备纯化培养基；对改良MRS培养基进行氮源和碳源优化；

步骤五：纯化培养：根据双歧杆菌性状对步骤三中的培养的菌落进行挑选，将挑选的菌种接种至步骤四制备的纯化培养液中进行纯化培养。

进一步地，所述步骤一中兔粪质量与蛋白胨缓冲液体积比为1:10。

进一步地，所述步骤三中培养温度为36-39摄氏度。

进一步地，所述步骤四中氮源为：大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白水解物和牛肉浸膏；碳源为：葡萄糖、异麦芽糖和乳糖。

进一步地，所述大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白水解物和牛肉浸膏质量比依次为2:1:1:1；所述葡萄糖、异麦芽糖和乳糖质量比依次为2:1:1。

进一步地，所述步骤五中培养条件为在温度为37-39摄氏度厌氧条件下培养10-16小时。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明通过两次离心处理，以及在分离培养中进行好氧培养处理，有效的降低了各菌种在形态上的分离和纯化难度，提高了双歧杆菌的活菌数量和纯化率。

2、本发明通过对纯化培养基的优化，有效的缩短了双气杆菌的培养时间，提高了培养效率，有效了降低了生产成本。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

具体实施方式