[发明专利]一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法

权利要求书

1.一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：制备样品液；取新鲜兔粪置于蛋白胨缓冲液中，充分搅拌均匀，一次离心处理后收集上层浊液；向上浊液加入适量蛋白胨缓冲液，再次离心处理后收集上层浊液，即为样品液；

步骤二：稀释样品液；取一定量样品液以十倍稀释法使用蛋白胨缓冲液进行稀释，稀释梯度为10^-1至10^-9；

步骤三：分离培养；分别取一定量的稀释梯度为10^-4至10^-9的稀释样品液置于培养基平板上，每个稀释梯度的稀释样品液做2至3个平行样；厌氧条件下培养45-50小时后在移至好氧条件下培养5-7小时；

步骤四：制备纯化培养基；对改良MRS培养基进行氮源和碳源优化；

步骤五：纯化培养；根据双歧杆菌性状对步骤三中的培养的菌落进行挑选，将挑选的菌种接种至步骤四制备的纯化培养液中进行纯化培养。

2.根据权利要求1所述的一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，其特征在于，所述步骤一中兔粪质量与蛋白胨缓冲液体积比为1:10。

3.根据权利要求1所述的一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，其特征在于，所述步骤三中培养温度为36-39摄氏度。

4.根据权利要求1所述的一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，其特征在于，所述步骤四中氮源为：大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白水解物和牛肉浸膏；碳源为：葡萄糖、异麦芽糖和乳糖。

5.根据权利要求4所述的一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，其特征在于，所述大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白水解物和牛肉浸膏质量比依次为2:1:1:1；所述葡萄糖、异麦芽糖和乳糖质量比依次为2:1:1。

6.根据权利要求1所述的一种从兔粪中分离双歧杆菌及其纯化方法，其特征在于，所述步骤五中培养条件为在温度为37-39摄氏度厌氧条件下培养10-16小时。