[发明专利]一种用于预测慢性乙肝肝纤维化的miRNA组合物

说明书

本发明涉及一种用于预测慢性乙肝肝纤维化的miRNA组合物，所述组合物包括hsa‑miR‑190b，hsa‑miR‑1285‑5p和hsa‑miR‑98‑5p，核苷酸序列分别见SEQ ID NO.1‑3。本发明解决了现有的肝穿刺有创检查以及肝纤维化的无创技术不能完全明确肝纤维化的程度的问题，通过qRT‑PCR对上述miRNA组合物进行检测，可以实现对慢性乙肝肝纤维化的早期诊断，miRNA是细胞的基因调控系统中的重要组成，miRNA作为生物学标志物是一种非侵入性取样，可以在无创条件下通过单独的miRNA或miRNA组合物的表达谱来辅助诊断被试者是否罹患慢性乙肝肝纤维化，提高了诊断的准确率。

技术领域

本发明涉及一种用于预测慢性乙肝肝纤维化的miRNA组合物，属于医学检验技术领域。

背景技术

微小RNA(microRNA)是一类内源性非编码单链小分子RNA，长度为18～24个核苷酸。在人类基因组中已发现超过500个微小RNA编码基因，预测可调控约5300个基因。微小RNA主要与靶mRNA的3’端非翻译区结合，引起靶mRNA沉默(降解或抑制翻译)，是一种发挥负调控作用的分子。近年对微小RNA生物功能的研究越来越多，发现其在机体生理及病理方面起重要作用，生理情况下参与细胞的增殖、分化过程，若表达及功能失调则可能导致包括白血病在内的肿瘤的发生，以及病毒、细菌感染等多种病理现象。

微小RNA普遍存在于人类的体液中，性质稳定，可以定量检测，且存在显著的疾病特异性。近年的研究表明，血液、唾液、尿液、乳汁及脑脊液等体液miRNA检测可应用于妊娠等生理状态的判断以及口腔癌、膀胱癌及阿尔海默茨病等疾病的诊断和预后判断。体液特异性miRNA检测的临床意义及应用前景已引起高度关注，miRNA作为一类非编码调节性的小分子RNA有可能取代传统的特异蛋白为代表的生物标志物。体液miRNA含量丰富且性质稳定，具备成为优异生物标志物的潜质，并且拥有以蛋白质为代表的传统生物标志物不具备的特性，无需抗体制备且易于精确定量，可能克服抗原抗体类生物标志物的制备瓶颈。

肝脏是人体内重要的器官之一，肝脏疾病尤其是病毒性肝炎、肝细胞癌、酒精性肝炎等病情重，治疗棘手，严重困扰着人类的健康，研究肝脏疾病的发病机制对其治疗至关重要。不断有研究发现，微小RNA与多种肝脏疾病相关，肝脏中的微小RNA表达异常或缺失可导致肝细胞凋亡、再生，甚至感染等，微小RNA参与众多肝脏疾病的病理发病过程。在众多肝脏疾病中，肝细胞癌和微小RNA的相互关系研究最多。近年研究发现，微小RNA失调和癌症发生发展密切相关，微小RNA参与癌症的病理发病过程。肝细胞癌的发生同样受微小RNA的调控，已发现在肝细胞癌中表达上调的微小RNA有miR-2l、miR-34a、miR-22l/222和miR-224等，而表达下调的有miR-122、miR-145和miR-199a等。

肝纤维化是各种肝脏疾病反复损伤，肝细胞的反复炎症坏死，在肝星状细胞活化等中心事件导致肝脏纤维结缔组织的沉积，是肝脏发展成肝硬化的一个必然过程。Knodell是第一个提出半定量评价肝脏组织学损伤的，以后不断报道了Scheuer,METAVIR,Ishak等肝组织的半定量评分标准，各有其优缺点，我国也开发了自己的GS评分系统。这些评分系统为准确认识肝脏病理损伤的程度起了重要的标准。了解肝脏的肝纤维化的程度有助掌握肝脏的病变程度，以决定是否需要治疗，对于慢性乙肝患者，各种指南均将中度以上肝纤维化定义为抗病毒治疗的条件。但应用这些评分系统就必需进行肝穿刺，肝穿刺的有创性以及本身肝穿刺的局限性，如穿刺组织体积小不能全面反映肝脏病变，以及肝脏病理阅片的主观性等问题限制了肝穿刺病理的推广应用，因此在临床上除了科研，以及属于指南建议的穿刺对象或者有证据显示可能有中度以上的肝纤维化证据，如脾脏肿大，血小板减少等，才会建议患者进行肝组织学检查。所以肝纤维化的无创性诊断长期来得到重视，最早应用于临床的血清学是一些反映细胞外基质代谢的指标如I～IV胶原，透明质酸，层黏蛋白以及基质金属酶等，这些指标曾经广泛应用于临床，但由于其特异性及敏感性均较差，被逐渐淘汰。

因此，寻找到新的诊断方法和更敏感的生物学标志是治疗慢性乙肝肝纤维化迫切需要解决的问题。

发明内容