[发明专利]人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法

权利要求书

1.一种人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，其包括：

将编码MIP-1α或SDF-1α的外源基因连接至载体质粒，再将所述载体质粒和包装质粒转染包装细胞，培养转染后的所述包装细胞，得到病毒载体，所述载体质粒为pSFV2，所述包装质粒为pHelper，所述外源基因的终止子后还连接有特异性标签，所述特异性标签用于编码至少一个特异性标签双连续重复多肽；

将所述病毒载体转染宿主细胞，经培养后，收集上清液，所述宿主细胞为真核细胞；以及

离心、纯化所述上清液，得到所述外源基因表达的具有生物活性的目的蛋白。

2.根据权利要求1所述的人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，所述特异性标签双连续重复多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，所述特异性标签的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求1所述的人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，所述特异性标签为两个。

5.根据权利要求1所述的人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，所述真核细胞为哺乳动物细胞。

6.根据权利要求5所述的人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞是幼仓鼠肾细胞。

7.根据权利要求1所述的人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，制备所述病毒载体的步骤还包括：用限制性内切酶对所述载体质粒和所述包装质粒进行酶切处理，形成线性DNA，再将所述线性DNA经转录得到RNA，将所述RNA转染所述包装细胞。

8.根据权利要求8所述的人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，所述限制性内切酶为SapI。

9.根据权利要求1所述的人源趋化因子MIP-1α或SDF-1α在真核细胞中的重组表达方法，其特征在于，还包括：将得到的所述目的蛋白在凝胶上进行垂直电泳，将电泳后的所述凝胶置于考马斯亮蓝染色液中浸泡14～16小时，进行显色。