[发明专利]一种从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒及其方法

说明书

本发明涉及分子生物技术领域，具体涉及一种从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、结合液、洗涤液I、洗涤液II、蛋白酶K溶液、磁珠悬浮液和洗脱液，所述裂解液包括10‑50mM Tris‑Hcl、5‑30mM EDTA、体积分数为0.5％‑2％的表面活性剂组合物和2‑6mol/L的高离液盐，所述结合液包括1‑6mol/L的高离液盐和体积分数40％‑80％的乙醇或异丙醇；本发明还公开了一种从口腔样本中提取基因组DNA的方法。采用本发明的试剂盒和方法在20min内即可提取得到DNA。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒及其方法。

背景技术

DNA提取纯化是分子生物学研究中的一项基础操作，提取得到的DNA可进一步用于基因检测、基因分型、PCR、酶切、分子杂交和文库构建等。以基因检测为例，基因检测是指对血液、其他体液、或细胞中的DNA序列进行分析，可获得所含有的基因类型和基因缺陷等，可用以诊断疾病、疾病风险的预测等。其中口腔样本作为采样样本比血液样本更有优势，是各大基因检测公司的首选样本。但是口腔脱落细胞中DNA含量有限，目前市面上常用的硅胶柱法需要耗费的时间长。

中国专利CN 107058286A，公开了一种基于磁珠法提取口腔样本基因组DNA的试剂盒及其使用方法，采用本专利所公开的技术方案对口腔样本中的基因组DNA进行提取，所需的时间在30分钟以上。

由于DNA在分子生物学实验中的应用日益广泛，提取DNA所消耗的时间又会直接影响接下来的实验或检测的进程，因此，提高DNA提取的效率很有必要。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种可从口腔样本中快速提取基因组DNA的试剂盒和从口腔样本中快速提取DNA的方法。

本发明的从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒采用如下技术方案：一种从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，所述试剂盒包括裂解液、结合液、洗涤液I、洗涤液II、蛋白酶K溶液、磁珠悬浮液和洗脱液，

所述裂解液包括10-50mM Tris-Hcl、5-30mM EDTA、体积分数为0.5％-2％的表面活性剂组合物和2-6mol/L的高离液盐，所述表面活性剂组合物选自吐温20、NP40和TritonX100中的任意2种，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种；

所述结合液包括1-6mol/L的高离液盐和体积分数40％-80％的乙醇或异丙醇，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种。

优选的，所述洗涤液I包括0.5-2mol/L的高离液盐和体积分数40％-80％的乙醇或异丙醇，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种。

优选的，所述洗涤液II包括体积分数为40％-80％的乙醇或异丙醇。

优选的，所述蛋白酶K溶液的浓度为20mg/ml。

优选的，所述磁珠悬浮液的浓度为10-50mg/ml，其中，磁珠为超顺磁性硅羟基磁珠，磁珠的核心为四氧化三铁或者三氧化二铁，磁珠的粒径为100nm-1um；溶剂为去离子水。

优选的，所述洗脱液包括1-10mM Tris-Hcl和1-10mMEDTA-2钠，所述洗脱液的PH为8.0-8.5。

优选的，所述裂解液、蛋白酶K溶液、结合液、磁珠悬浮液、洗涤液I、洗涤液II和洗脱液的体积比为45:1:40:2:70:70:(5-10)。

本发明的从口腔样本中提取基因组DNA的方法，包括如下步骤：