[发明专利]一种从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括裂解液、蛋白酶K溶液、结合液、磁珠悬浮液、洗涤液I、洗涤液II和洗脱液，

所述裂解液包括10-50mM Tris-Hcl、5-30mM EDTA、体积分数为0.5％-2％的表面活性剂组合物和2-6mol/L的高离液盐，所述表面活性剂组合物选自吐温20、NP40和TritonX100中的任意2种，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种；

所述结合液包括1-6mol/L的高离液盐和体积分数40％-80％的乙醇或异丙醇，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种。

2.根据权利要求1所述的从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述洗涤液I包括0.5-2mol/L的高离液盐和体积分数40％-80％的乙醇或异丙醇，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述洗涤液II包括体积分数为40％-80％的乙醇或异丙醇。

4.根据权利要求1所述的从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述蛋白酶K溶液的浓度为20mg/ml。

5.根据权利要求1所述的从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述磁珠悬浮液的浓度为10-50mg/ml，其中，磁珠为超顺磁性硅羟基磁珠，磁珠的核心为四氧化三铁或者三氧化二铁，磁珠的粒径为100nm-1um。

6.根据权利要求1所述的从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述洗脱液包括1-10mM Tris-Hcl和1-10mMEDTA-2钠，所述洗脱液的PH为8.0-8.5。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的从口腔样本中提取基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述裂解液、蛋白酶K溶液、结合液、磁珠悬浮液、洗涤液I、洗涤液II和洗脱液的体积比为45:1:40:2:70:70:(5-10)。

8.一种从口腔样本中提取基因组DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：向盛有口腔样本的反应容器中，加入裂解液，涡旋震荡，弃去棉签或者采样拭子，加入蛋白酶K，混匀，置于65℃保温，所述裂解液包括10-50mM Tris-Hcl、5-30mM EDTA、体积分数为0.5％-2％的表面活性剂组合物和1-6mol/L的高离液盐，所述表面活性剂组合物选自吐温20、NP40和TritonX100中的任意2种，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种；

步骤二：保温结束后，加入结合液和磁珠悬浮液混匀，之后放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后，弃去上清液，所述结合液包括1-4mol/L的高离液盐和体积分数40％-80％的醇类组成，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种，所述醇为乙醇或异丙醇；

步骤三：加入洗涤液I，涡旋混匀，之后放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后，弃去上清液；

步骤四：加入洗涤液II，涡旋混匀，之后管置于磁力架上，待磁珠完全吸附后，弃去上清液，室温晾干；

步骤五：加入洗脱液，涡旋混匀，置于65℃洗脱，之后放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后，上清液中即含有目标DNA。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述洗涤液I由0.5-2mol/L的高离液盐和体积分数40％-80％的醇类组成，所述高离液盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍和高氯酸钠中的任意一种，所述醇为乙醇或异丙醇；所述洗涤液II选自体积分数为40％-80％的乙醇或异丙醇；所述蛋白酶K溶液的有效浓度20mg/ml；所述磁珠悬浮液的有效浓10-50mg/ml，其中，磁珠为超顺磁性硅羟基磁珠，磁珠的核心为四氧化三铁或者三氧化二铁，磁珠的粒径为100nm-1um；所述洗脱液由1-10mM Tris-Hcl与1-10mMEDTA-2钠组成，所述洗脱液的PH为8.0-8.5。