[发明专利]一种细胞膜仿生脂蛋白靶向纳米递药系统的制备及应用

权利要求书

1.一种细胞膜仿生脂蛋白靶向纳米递药系统，其特征在于：该递药系统以内核药物载体重组高密度脂蛋白物理包埋抗肥胖药物形成载药内核，再将靶向脂肪组织的特异性配体所修饰的细胞膜仿生外壳包裹在载药内核表面，得到最终纳米粒；所述抗肥胖药物组合物为两个药物的组合，一个为促血管生长药物，另一个为促白色脂肪组织褐化药物；所述重组高密度脂蛋白由磷脂、胆固醇和载脂蛋白制备而成；所述细胞膜为巨噬细胞膜；所述特异性配体为P3肽，P3肽是氨基酸序列为CKGGRAKDC的九肽，其与硬脂酸通过酯键连接形成偶联物，记为P3-硬脂酸偶联物，所述载脂蛋白为ApoA-I。

2.根据权利要求1所述的一种细胞膜仿生脂蛋白靶向纳米递药系统，其特征在于，所述抗肥胖药物为罗格列酮和西地那非。

3.根据权利要求1所述的细胞膜仿生脂蛋白靶向纳米递药系统，其特征在于，所述重组高密度脂蛋白中磷脂为卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸或磷酯酰丝氨酸中的一种及一种以上。

4.根据权利要求1-3中任意所述的一种细胞膜仿生脂蛋白靶向纳米递药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)重组高密度脂蛋白载药内核的制备

将一定量的磷脂、胆固醇、罗格列酮和西地那非混合溶解在有机溶剂中，37℃水浴下减压旋蒸得一层薄膜，然后真空干燥过夜以除去多余的有机溶剂，之后加入适量的纯水在40℃水浴中水化至完全，超声分散得含乳光的纳米混悬液；加入一定量的ApoA-I的pH为7.4的磷酸盐缓冲液搅拌过夜，去离子水透析12h，去除游离的ApoA-I，得到重组高密度脂蛋白载药内核；

(2)巨噬细胞膜的提取

将巨噬细胞培养瓶中的培养基倒掉，pH为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤3次后将巨噬细胞吹打下来，1000rpm离心去上清液；在沉淀中加入细胞裂解液，4℃裂解过夜，然后探头超声10min，3200×g离心5～10min，弃沉淀，将上清液在4℃ 18000×g条件下离心45～60min，弃掉上清液，将沉淀重悬于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中得巨噬细胞膜混悬液；所述的细胞裂解液由1mM碳酸氢钠，0.2mM乙二胺四乙酸和1mM丝氨酸蛋白酶抑制剂组成；

(3)细胞膜仿生重组高密度脂蛋白载药纳米粒的制备

将重组高密度脂蛋白载药内核与巨噬细胞膜混悬液按一定比例混合，然后用物理挤出的方式分别过800nm、400nm和200nm聚碳酸酯膜进行挤出，每种大小的膜来回挤出4～9次后，将得到的液体于6000×g条件下离心2min，除去多余游离膜，得细胞膜仿生重组高密度脂蛋白载药纳米粒；

(4)P3肽修饰的细胞膜仿生重组高密度脂蛋白载药纳米粒的制备

将P3-硬脂酸偶联物的pH为7.4的磷酸盐缓冲液与细胞膜仿生重组高密度脂蛋白载药纳米粒混悬液按一定比例混合，37℃孵育60min后，用去离子水透析12h，除去游离的肽，得P3肽修饰的细胞膜仿生重组高密度脂蛋白载药纳米粒。

5.根据权利要求4所述的一种细胞膜仿生脂蛋白靶向纳米递药系统的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇中的任意一种或一种以上；磷脂与胆固醇的质量比为8∶1～4∶1，罗格列酮与西地那非的质量比为4∶1～1∶4，磷脂与两药质量之和的比例为20∶1～7∶1，磷脂与ApoA-I的质量比为100∶1～10∶1；步骤(3)中重组高密度脂蛋白载药内核与巨噬细胞膜的体积比为1∶1～1∶4；步骤(4)中P3-硬脂酸偶联物与细胞膜仿生重组高密度脂蛋白载药纳米粒的质量比为1∶20～1∶100。

6.根据权利要求4所述的一种细胞膜仿生脂蛋白靶向纳米递药系统的制备方法，其特征在于，步骤(1)中的超声频率为200W，工作1s，间歇2s，探头超声总时长为10min；步骤(2)中的超声频率为400W，工作2s，间歇2s，探头超声总时长为10min。