[发明专利]一种喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB及其鉴定方法

说明书

本发明公开了一种喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB及其鉴定方法，喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB，含一个663bp的完整开放阅读框ORF，ORF的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；鉴定方法包括：筛选含有耐盐碱相关的基因片段，构建含有yigB基因的原核表达载体；通过化转异源宿主Escherichia coli KNabc，将基因yigB导入KNabc宿主中，对基因yigB生理功能、Na⁺耐受能力、脱卤酶活性及编码的蛋白活性进行鉴定。本发明所提出的yigB基因对盐碱地土壤改良具有重要意义，可用于构建高效耐盐碱工程菌株、开发微生物肥料和提高植物耐盐碱性的转基因植物领域的研究。

技术领域

本发明涉及分子生物学和基因工程技术领域，尤其涉及一种喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB及其鉴定方法。

背景技术

我国的盐渍土(盐碱土)具有种类特异、分布广泛、面积之多等特点，分布在我国的东北、西北、中原、西藏、内蒙等地区。盐渍土壤还有大量的可溶性盐，主要包括一些硫酸盐和碳酸盐(硫酸钠、碳酸钠等)，以及一些氯化物和重碳酸盐。因为盐渍土壤具有农作物难以生长的环境，大量的可溶性盐破坏了农作物细胞内的渗透压，使得植物失去离子平衡、酸碱平衡等稳态环境，对农作物生长有着不可小视的破坏作用。盐渍土壤虽是世界上最低产的土壤之一，但可恢复性高、潜力巨大，已是世界上各界学者长期关注研究的问题之一。由松花江和嫩江冲击而成的松嫩平原有着370万公顷的盐碱地，它作为全球三大苏打盐碱地的集中分布区之一，已成为黑龙江省最有潜力的待开发土地资源。由于东北地区独特的气候环境以及人为因素的影响，该地区的盐碱地恶化严重，并以1.4％的速度扩展延伸，应当引起我们的足够重视。

土壤复垦是指利用物理方法、化学方法以及生物方法等方法，将破坏和退化的土壤中的阻碍农作物生长的物质降低到可重新利用开垦的程度。我国作为一个农业大国，土地资源是人民耐以生存、国家长治久安的重要保障，将盐渍化的土地恢复成可利用开发的土地，重新构建新的土壤生态平衡，是我国解决土地匮乏等问题的重要手段。目前采用生物修复的方法，即利用动物、植物、微生物与环境之间的相互作用关系和一些代谢途径，将土壤中的一些污染物(或不利于生物生长的物质如高浓度的碳酸盐、硫酸盐)转化降解。生物修复在世界多地取得显著成效，松嫩平原盐碱地复垦迫在眉睫。微生物作为生态系统中的最底层的阶层—分解者，具有体积小、繁殖快、生命力强、代谢稳定等优势，并且其在生命进程中产生大量的次级代谢物，能够高效将土壤中的盐离子转移或降解，能达成对盐渍土地复垦的目标。因此在土地复垦过程中对耐盐微生物中耐盐碱功能基因的研究有着举足轻重的意义。

所以，对抗盐基因的分离是当前利用基因工程方法进行抗盐作物培育的首要任务。

综上所述，现有技术存在的问题是：

目前技术缺陷在于可用于土壤改良的微生物肥料和植物不具备高效的耐盐碱的能力，并在规模化地发掘高效耐盐碱的新功能基因用以构建相应基因工程菌株微生物肥料和转基因植物方面缺乏理论依据，且在进行抗盐作物培育方面缺乏有效的鉴定方法。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB及其鉴定方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

本发明针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB及其鉴定方法。利用构建基因文库的创新技术手段，发现一种高效的喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB，所述喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB，含一个 663bp的完整开放阅读框ORF，ORF的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，并通过新型基因工程手段构建高效耐盐菌株，从而为培育高效土壤改良微生物和植物提供了可能。其中:喜盐芽胞杆菌，保藏时间2012年06月12日，保藏编号CGMCC N0.1.12153，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。

本发明的另一目的在于提供一种利用上述喜盐芽胞杆菌耐盐碱基因yigB编码的蛋白，核苷酸序列为SEQ ID NO.2。