[发明专利]一种重组微生物、其制备方法及其在生产辅酶Q10中的应用

权利要求书

1.一种生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述方法使用重组微生物，所述重组微生物含有编码全局调控蛋白irrE的基因和渗透压调控型启动子proPB，所述编码全局调控蛋白irrE的基因为SEQ ID NO：1所表示的核苷酸序列，所述渗透压调控型启动子proPB为SEQ IDNO：2所表示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述重组微生物的制备包括如下步骤：

a.从含有编码全局调控蛋白irrE的基因的亲本菌株中克隆得到所述编码全局调控蛋白irrE的基因；

b.将所述的编码全局调控蛋白irrE的基因连接到载体上，构建含有所述编码全局调控蛋白irrE的基因的重组载体，

其中，通过启动子替换，将所述重组载体上的控制所述编码全局调控蛋白irrE的基因表达的启动子敲除后插入所述渗透压调控型启动子proPB，进一步调控所述编码全局调控蛋白irrE的基因的表达；

c.将所述重组载体导入宿主细胞中从而得到所述重组微生物。

3.根据权利要求1或2所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述渗透压调控型启动子proPB分离自细菌。

4.根据权利要求3所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述细菌为埃希氏菌属(Escherichia)。

5.根据权利要求3所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述细菌为大肠杆菌(Escherichia coli)。

6.根据权利要求2所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述步骤b的载体选自pBR322、pACYC177、pACYC184、RK2、pBBR1MCS-2、粘粒载体。

7.根据权利要求6所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述步骤b的载体为pBBR1MCS-2。

8.根据权利要求2所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述步骤a包括根据SEQ IDNO：1所示的DNA序列设计引物，以从所述亲本菌株中提取的基因组DNA为模板，采用PCR法合成所述编码全局调控蛋白irrE的基因。

9.根据权利要求2所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述亲本菌株为细菌。

10.根据权利要求9所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述细菌为异常球菌属(Deinococcus)。

11.根据权利要求10所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述细菌选自由耐辐射异常球菌(Deinococcus radiodurans)、沙漠异常球菌(Deinococcus deserti)、戈壁异常球菌(Deinococcus gobiensis)、解蛋白异常球菌(Deinococcus proteolyticus)组成的组。

12.根据权利要求11所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述细菌为耐辐射异常球菌(Deinococcus radiodurans)。

13.根据权利要求2所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述步骤c的导入方式选自转化、转导、接合转移或电穿孔，所述宿主细胞选自细菌或真菌。

14.根据权利要求13所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述细菌为红细菌属的细菌。

15.根据权利要求14所述的生产辅酶Q10的方法，其特征在于，所述红细菌属的细菌为类球红细菌。