[发明专利]用于检测HPV的试剂盒

说明书

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种用于检测HPV的试剂盒。所述试剂盒包括用于扩增HPV的引物，以及Uvs X、Uvs Y、SSB和DNA聚合酶。本发明提供的用于检测HPV的试剂盒中，选用了T4系列酶组合即Uvs X和Uvs Y取代现有的重组酶，该酶体系不仅可以进一步提高HPV检测的灵敏度和专一性，而且对扩增HPV的引物选择可更加多元化，可以在较短引物条件下扩增100‑200bp产物，进而缩短反应时间，降低背景信号的干扰，最终提高检测效率，显著降低检测成本。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种用于检测HPV的试剂盒。

背景技术

人类乳突病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一种比细菌还小的微生物，是滤过性病毒的一种。在目前已知的200多种亚型HPV中，大约40种亚型可以侵犯女性生殖道，至少15种亚型与侵袭性子宫颈癌有关，称为致癌性或高危险性型，其中第16型最为常见，第18型次之，两者合起来已占了子宫颈癌的70％。人类乳突病毒具有高度的宿主专一性特性，专门会感染人类的皮肤及黏膜。感染第16型及18型人类乳突病毒与子宫颈癌、阴茎癌、会阴癌和肛门癌等的形成有关。

目前市面上HPV的检测方法有很多种，包括杂交捕获法、荧光原位杂交法、芯片技术杂交法、实时荧光PCR法、斑点印记法及恒温扩增法等，每种检测方法的敏感性、特异性均有所不同。无论哪种检测方法，都不能检测所有的型别，但是也不必过于担心漏诊的问题，因为子宫颈癌的发生，只与高危型HPV有关，如上述提到的70％宫颈癌患者感染的为16型和18型两个亚型，其他的高危型HPV在现有的检测方法中基本都能查出。因此，若高危型HPV的检测结果为阴性，则基本可排除子宫颈癌的可能性。

恒温扩增(Isothermal Amplification)中一个重要代表技术为重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)。此技术是由英国公司Twist Dx Inc开发的一种可以替代传统PCR的新型核酸检测技术。利用该技术，能够在30分钟内进行常温下的单分子核酸检测，该技术对硬件设备的要求较低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。但是，现有的RPA扩增技术还存在缺陷，如针对～500bp->500bp的目标产物(酶搭配的选择)容易造成灵敏度差及反应时间长(见文献：TwistAmpManuals.Available from:www.twistdx.co.uk/resources/instruction_manuals/twistamp_product_documentatio n/)，而且扩增后的产物有背景信号干扰的问题(见文献：O.Piepenburg,C.H.Williams,D.L.Stemple and N.A.Armes,PLoS Biol.,2006,4,e204,1115–1121.)。因此，该RPA扩增技术有待进一步改进。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种用于检测HPV的试剂盒，旨在解决现有RPA法检测HPV时，存在专一性与灵敏度不高的技术问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供一种用于检测HPV的试剂盒，所述试剂盒包括用于扩增HPV的引物，以及Uvs X、Uvs Y、SSB和DNA聚合酶。

恒温扩增法中酶的组合搭配非常关键，RPA技术主要依赖于三种酶蛋白：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶(Recombinase)、单链结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶(Polynerase)，而本发明提供的用于检测HPV的试剂盒是一种基于恒温扩增的试剂盒，在该试剂盒中，选用了T4系列酶组合即Uvs X和Uvs Y取代现有的重组酶，该酶体系相对现有技术，不仅可以进一步提高HPV检测的灵敏度和专一性，而且对扩增HPV的引物选择可更加多元化，可以在较短引物条件下扩增100-200bp产物，进而缩短反应时间，降低背景信号的干扰，最终提高检测效率，显著降低检测成本。